细胞生物学实验Cell Biology Experiment目录1.显微镜的结构及细胞形态观察、大小测量和死活细胞鉴定2.液泡系和线粒体的活体染色3.叶绿体的分离与观察4.DNA的细胞化学——Feulgen反应5.多糖的显示——PAS反应6.细胞内碱性蛋白和总体蛋白的原位显示7.细胞骨架的光学显微观察和永久制片技术8.植物原生质体的制备与融合9.蚕豆根尖微核试验10.膜的通透性11.血细胞的分化和不同类型血细胞的观察实验报告要求1．注意页面四边留白，不要挤到页边！2．抬头填写完整。

3．注意事项自己总结，不要抄袭！4．组长检查后上交存档。

生物绘图注意事项1．2H 以上绘图铅笔削尖、绘图橡皮、直尺2．边看显微镜边按视野中实际情况绘图，以精确为主，不能艺术加工。

3．应找到最典型、最能说明绘图目的的物像来绘图。

先轻勾出轮廓，检查无误后，再以准确清晰的线作最后描绘。

①实线表示轮廓，虚线表示被遮蔽但需表现的轮廓，线粗细应均匀有规律②圆点的疏密表示明暗、凹凸（越暗的地方点越多）点点时笔尖直立，点大小、疏密要均匀、整齐、浑圆，不能像“，”。

4．用尺向右侧引出水平指示线，线右端平齐字注在右侧。

图下方写上所画图的名称及放大倍数。

图的右侧和下方需写文字说明，所以图应绘在绘图纸上偏左上方的位置。

5．一幅图只要详细画出部分结构，其余勾画出轮廓即可。

规范不规范实验一普通显微镜的使用及细胞形态观察、大小测量和死活细胞鉴定一、实验目的1．熟悉普通光学显微镜的基本构造和性能，掌握使用方法。

2．了解细胞的一般形态和基本结构。

3．掌握显微测微尺的使用，对细胞大小有一直观认识。

4．了解鉴定死活细胞的方法。

二、实验原理1．显微测微尺的使用镜台测微尺：表示绝对长度，长1 mm，分成100小格，每小格为0.01mm。

不被用来直接测量，而是用它来校正目镜测微尺，故其质量对所测微体影响极大。

目镜测微尺：是一块比目镜筒内径稍小的有标尺的圆形玻璃片，标尺长10毫米、分为100格。

需要镜台测微尺校正为绝对长度再测定细胞大小。

2．死活细胞鉴定:台盼蓝是一种低毒的活体染色剂，只能透过质膜受损的细胞或死细胞。

三、实验用品1．试验材料：洋葱内表皮细胞口腔上皮细胞、（人的口腔上皮细胞是扁平、多边形的，形状不很规）2．试剂0.2%台盼蓝溶液3．仪器测微尺（2套）、普通光学显微镜、刀片、镊子、玻璃滴管、吸水纸、牙签。

四、试验方法一、细胞死活的鉴定0.2%台盼蓝染色5-10分钟后进行观察。

二、细胞大小测量1）测量时，镜台微台尺换成样本，2)目镜测微尺来测量细胞的大小3)改变显微镜的放大倍率，则需对目镜测微尺重新进行标定。

三、细胞形态的观察五、注意事项取口腔黏膜上皮细胞注意的问题1．口腔上皮细胞主要分布在口腔两侧颊部。

用消毒牙签的钝端，在漱净的口腔任意一侧的颊部，轻轻刮几下。

2．取材前，口腔一定要用清水漱净，去除口腔内的食物残渣。

3．用方签在口腔壁上轻轻刮动，不要刮在牙缝里，因为牙齿上刮下来的是食物碎屑，不是口腔上皮细胞。

六、作业1．绘制口腔黏膜上皮细胞及洋葱内表皮细胞图（2-3个细胞）2．列表写出洋葱内表皮细胞长轴、短轴长度，并计算平均值。

（取3个细胞）3．取口腔黏膜上皮细胞注意的问题4．生物绘图注意事项实验二线粒体和液泡系的超活染色与观察一、实验目的1、了解细胞和细胞器的超活染色技术。

2、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡的形态、数量和分布,了解植物细胞液泡系的发育过程。

二、实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。

活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。

体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。

体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的电化学特性起重要作用。

碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此就发生了吸引作用。

但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总要配成稀淡的溶液来使用。

一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，Janus green B和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。

线粒体是细胞内重要的细胞器，线粒体内膜上分布有细胞色素氧化酶，该酶能使詹姆斯绿B保持在氧化状态，呈现蓝绿色从而使线粒体显色，而细胞质中的染料被还原成无色。

液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，有十分重要的功能。

中性红是液泡的特殊染色剂，将液泡染成红色。

在活细胞中，细胞质和细胞核不着色。

如果细胞死亡，染料会弥散开来，使核着色。

三、实验用品（一）器材显微镜、恒温水浴锅、镊子、刀片、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸等。

（二）试剂1、Ringer 溶液生理盐水、缓冲液氯化钠0.85g（变温动物用0.65g）；氯化钾 0.25g ；氯化钙 0.03g ；蒸馏水100ml2、10%、1/3000中性红溶液称取0.5中性红溶于50ml Ringer溶液，稍加热（30-40度）使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。

临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml，加入29mlRinger溶液混匀，装入棕色瓶备用。

3．1%、1/5000詹姆斯绿B溶液称取50mg詹姆斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加微热（30-40度）使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。

取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液，装入瓶中备用。

最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。

（三）材料人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞、小麦幼根根尖。

四、实验方法(一) 线粒体的超活染色与观察1、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察载玻片→ 37℃水浴锅的金属板→滴两滴詹纳斯绿B染液牙签→从口腔粘膜刮取上皮细胞→放入载玻片染液→染色10-15分钟（注意不可使染液干燥, 必要时可再加滴染液）→盖上盖玻片用吸水纸吸去四周溢出的染液→观察2.洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色载玻片→撕取一小片洋葱鳞茎内表皮滴→一滴詹纳斯绿B染液→染色10-15分钟吸去染液→加一滴Ringer液，注意使洋葱内表皮展平→盖上盖玻片→观察（二）液泡系的超活染色与观察刀片→小麦幼苗根尖→切一纵切面→中性红染色5-10分钟吸去染液→加一滴Ringer液→盖上盖玻片→镊子轻轻下压盖玻片→观察五．实验结果在小麦根尖细胞制片中，可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。

然后，由生长点向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大，数目变少。

在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部分空间，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。

六．注意事项1、詹姆斯绿B溶液现用现配，以保持它的充分氧化能力。

2、实验中速度要快，以免组织细胞死亡。

七、作业1 ．画出你所观察到的线粒体和液泡的图像.2 ．总结实验成功或失败的原因.实验三叶绿体的分离与观察一、实验目的通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。

二、实验原理细胞器分离的过程包括两个主要阶段：破碎细胞和细胞组分的分离。

叶绿体的分离采用在等渗溶液中进行组织匀浆、分离。

叶绿体的分离采用差速离心或密度梯度离心法进行。

差速离心主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离不同大小的细胞器。

起始的离心速度较低，让较大的颗粒沉降到管底，小的颗粒仍然悬浮在上清液中。

收集沉淀，改用较高的离心速度离心悬浮液，将较小的颗粒沉降，以此类推，达到分离不同大小颗粒的目的。

差速离心的分辨率不高，沉降系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开，常用于其他分离手段之前的粗制品提取。

三、实验用品1.材料：菠菜叶片2.试剂：蒸馏水，0.35mol/L氯化钠溶液3.仪器：普通离心机、天平、显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、离心管、吸水纸等四、实验方法1.菠菜叶片(去叶脉)3g → 0.35mol/L氯化钠15ml→研磨(冰浴)→匀浆过滤(6层纱布)→滤液在1000rpm离心2min→弃沉淀，上清液3000rpm离心5min →去上清液→沉淀为叶绿体(混有部分细胞核)，用0.35mol/L氯化钠溶液悬浮→滴片观察2.取叶绿体悬液1滴置于载玻片上，加盖玻片后用用普通光学显微镜观察叶绿体的形态结构3.菠菜叶手切片观察新鲜菠菜叶，刀片切出一斜面置于载玻片上，滴加1-2滴NaCl溶液，盖上盖片，显微镜下观察。

用镊子摄取或刀片刮取新鲜菠菜叶片叶肉，滴加1-2滴NaCl溶液，作临时装片。

五、实验结果1.普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄型，高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色颗粒，即基粒。

2.菠菜叶手切片在普通光镜下可以看到三种细胞：表皮细胞、保卫细胞、叶肉细胞。

叶肉细胞呈长方形或类方形，内含大量带有绿色的叶绿体颗粒。

另外，视野下还可见到大量散在的点状或类圆状叶绿体颗粒。

3.红辣椒细胞中有许多红色小颗粒，这就是杂色体。

杂色体分散在细胞质中。

六、注意事项1.叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35mol/L氯化钠)中进行,以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。

2.分离过程最好在0-5℃的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。

3.离心机使用：离心管要平衡七、作业1.根据显微观察结果，绘制菠菜叶的结构模式图。

实验四细胞骨架的光学显微观察和永久制片技术一、实验目的掌握植物细胞内细胞骨架的光学观察方法，了解细胞骨架在细胞内的分布特点。

二、实验原理细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构，按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。

它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。

光学显微镜下细胞骨架的形态学观察多用1% Triton X-100处理细胞，可将细胞质膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解抽提，而细胞骨架系统的蛋白质被保存，再用考马斯亮蓝R250染色，使得胞质中细胞骨架得以清晰显现。

Triton X-100：是非离子型表面活性剂（去污剂）。

适当浓度的Triton X-100处理细胞时，可将细胞质膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存。