实验步骤
5、弃固定液，磷酸缓冲液(pH 6.8)洗3次, 每次5min 6、0.2%考马斯亮蓝R250染色10min－15min。
7、蒸馏水洗数遍，然后将样品置于载玻片 上,加盖玻片，于普通光学显微镜下观察。
作业
描述所观察到的洋葱鳞叶图（ 说明实验中使用的TritonX-100、戊二醛、
蛋白质的特异性染料考马斯亮蓝R250染色
考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白质染料，它可 以使各种细胞骨架蛋白质着色，并非特异地显示 微丝 由于有些细胞骨架纤维在该实验条件下不够稳定， 例如微管；还有些类型的纤维太细，在光学显微 镜下无法分辨，因此我们看到的主要是微丝组成 的张力纤维，直径约40nm左右
细胞骨架的观察
实验目的
掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原 理及方法 观察光学显微镜下细胞骨架的网状结构
实验原理
细胞骨架是指真核细胞中的蛋白纤维网架
体系。 广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质 骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。 狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，包括微 丝、微管、中间纤维。
实验步骤
1、用镊子撕取洋葱鳞叶内侧的表皮若干片约 1cm2大小)，置于烧杯中，加入pH6.8磷酸缓冲液， 洗3次，每次约0.5min，使其下沉； 2、吸去磷酸缓冲液，用1％Triton X—100 处理 处理 30min。
3、吸去Triton X—100，用M缓冲液洗3次,每次 5min，稳定细胞骨架。 4、用3％戊二醛固定10min。
考马斯亮蓝R-250的作用
荧光显微镜下显示细胞骨架：红色荧光显示微丝 黄色显示微管
实验原理
植物细胞用适当浓度的TritonX—100处理 后，可破坏细胞膜和细胞内蛋白质，但细 胞骨架系统的蛋白质却保护完好。
戊二醛固定，戊二醛是一种双交联剂，渗 透快，交联能力强，对蛋白质的固定效果 好，且不破坏细胞骨架的结构
实验原理