⑶ pH8.0 缓冲液：取 0.2mol/LNa 2 HPO4 溶液 972ml，0.1mol/L 柠檬酸溶液 28ml 混合即成。 6.0.9 ％ NaCl 溶液
1. 取试管 4 支编号，按下操作： 表 4 激动剂和抑制剂影响酶活性的实验观察
pH 6.8
1 ％淀粉 蒸馏水
0.9 ％ 1％
缓冲液 溶液
NaCl
CuSO4
1
20 滴
10 滴
10 滴
－
－
2
20 滴
10 滴
－
10 滴
－
3
20 滴
10 滴
－
－
10 滴
4
20 滴
10 滴
－
－
－
1
％
Na2SO4
－
－ －
10 滴
一、唾液淀粉酶的收集与处理
操作方法
1. 制备唾液
实验者先将痰咳尽， 用自来水漱口， 以清除口腔内食物残渣， 再在口腔内含蒸馏水约 15ml，
并作咀嚼咕漱运动， 3 分钟后吐入垫有两层经润湿处理的脱脂纱布的漏斗内，过滤于小烧杯
中备用，为与下面稀释唾液相区别，此称制备唾液。
2. 煮沸唾液
取上述唾液约 2ml，盛入 1 中号试管中 , 置沸水浴煮沸 5 分钟备用。
试剂和器材
一、器材
1. 滴管、烧杯、试管（架）及试管夹
。
2. 恒温水浴箱与水浴锅。 3. 脱脂棉、漏斗及纱布。
4. 白瓷反应盘
二、试剂 1.1 ％淀粉 称取淀粉 1g，岳阳家政 加少量水调成糊状，加入煮沸的 100m1。 2.1 ％蔗糖溶液
0.3 ％NaCl 溶液至
3. 班氏试剂 A 液：取柠檬酸钠 173ｇ，无水碳酸钠 100ｇ，加水 600ml ，加热溶解，冷 却后稀释至 850ml；B 液：取结晶硫酸铜 （CuSO4·5H2O）17.3 ｇ溶于 100ml 预热的蒸馏水中， 冷却后加水至 150ml。将 A 液缓慢倒入 B 液中混匀置试剂瓶备用。
3. 稀释唾液
调整唾液淀粉酶活性， 使之在 pH6.8 、37℃和既无激动剂又无抑制剂条件下， 作用 5min，水
解淀粉至红色糊精为宜。具体做法是取 12 凹白瓷反应板一块，按下列步骤操作：
①第 1 排每凹各加 1 滴制备唾液， 12 、13、 14 凹分别加生理盐水 1、 2、 3 滴，用滴管采用抽
2.将一、二管移入冰水浴中，待各管温度一致后速向各管加入碘液 并说明温度对酶促反应的影响。
1 滴，混匀后观察各管颜色的区别，
四、 pH 影响酶促反应的实验观察 1. 取试管 3 支编号，按下表 3 操作：
表 3 pH 影响酶促反应的实验观察
试管 1 试管 2 试管 3
pH4.0 缓冲液 pH6.8 缓冲
③在第 2 排各凹中加 I 液一滴，混匀，观察比较各凹颜色，以浅棕 -红色对应的稀释倍数，
用生理盐水稀释 3ml 制备唾液备用。
二、 唾液淀粉酶的专一性以及温度、 pH、激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性影响的观察
（一）取试管 3 支编号，按下表 1 操作 表 1 唾液淀粉酶专一性的实验观察
试剂
试管 1 2 3
表 2 温度影响酶促反应的实验观察
管号
试剂 1.pH6.8 缓冲液 2.1 ％淀粉溶液 3. 预热 5min 4. 直接加入稀释唾 液， 立即混匀、 计时
5. 保温 10min
1
20 滴 10 滴 37℃水浴 5滴 37℃水浴
2
20 滴 10 滴 沸水浴 5滴 沸水浴
3
20 滴 10 滴 冰浴 5滴 冰浴
实验六 淀粉酶的专一性和温度、 pH、激活剂 及抑制剂对酶活性的影响
实验类型：验证型
目的和要求 1. 通过本实验观察、验证酶的专一性和温度、 pH、激动剂及抑制剂对酶活性的影响。 2. 熟悉淀粉及其酶解产物的特殊显色方法；电热恒温水浴的使用。 3. 了解唾液淀粉酶的收集与预处理。
原理
酶具有高度专一性，一种酶只能催化一种或一类底物发生反应，如淀粉酶只能水解淀 粉，不能水解蔗糖。当淀粉被淀粉酶彻底水解为还原性麦芽糖和葡萄糖时，能使班氏试剂 的 Cu2+ 还原成 Cu1+，生成砖红色 Cu2O沉淀。淀粉酶的活性受温度、 pH、激动剂及抑制剂、 酶浓度以及作用时间等多种因素影响，因而水解淀粉生成一系列分子大小不同的糊精。不 同程度的水解糊精可与碘反应生成紫色、棕色或红色络合物。通过上述特征性反应，并以 蔗糖等作对照，便可观察、验证淀粉酶是否具有专一性以及它的催化活性是否受到影响。
稀释唾 液 5滴 5滴 5滴 5滴
2. 将上述各管放入 37℃水浴中保温 10 分钟 怎么减肚子 ，然后每管加入碘液 1 滴，混匀 后观各管颜色的区别，并说明激动剂和抑制剂对酶促反应的影响。
注意事项 1.反应试管应清洗干净，不同酶液、试剂及其滴管不能交叉混用； 2.使用混合唾液，或通过预试选出合适的唾液稀释度，效果更为显著。
液
20 滴 －
－ 20 滴
－
－
pH8.0 缓冲 液
－ － 20 滴
1％淀粉溶 液
10 滴 10 滴 10 滴
稀释唾液
5滴 5滴 5滴
2.将上述各管混匀后，置 37℃水浴中保温 10 分钟，然后每管加入碘液 1 滴，混匀后观察 各管颜色的区别，并说明 pH 对酶促反应的影响。
五、激动剂和抑制剂影响酶活性的实验观察
Hale Waihona Puke 4. 碘液：称取碘 4g、碘化钾 6g 溶于 l000ml 蒸馏水中，置棕色瓶内贮存备用。
5. 各种 pH 缓冲液
⑴ pH6.8 缓冲液：取 0.2mol/LNa 2HPO4 溶液 772ml，0.1mol/L 怎么减肚子 柠檬酸溶液 228ml 混合即成。
⑵ pH4.0 缓冲液：取 0.2mol/LNa 2HPO4 溶液 385.5ml ， 0.1mol/L 柠檬酸溶液 614.5ml 混 合即成。
pH6.8 缓冲 液
20 滴 20 滴 20 滴
1％淀粉溶 液
10 滴 10 滴 －
1％蔗糖 制 备 唾
煮沸唾液
溶液
液
－
5滴
－
－
－
5滴
10 滴
5滴
－
将上述各管混匀后，置 37℃水浴中保温 10 分钟，然后每管加入班氏试剂 沸水浴中煮沸约 15 分钟，观察各管颜色反应，并说明原因。
20 滴，再放入
（二）温度影响酶促反应的实验观察 1.取试管 3 支编号，按下表 2 操作：
吸法，由稀到浓（ 14→１2）小心混匀各凹，勿使溅入相邻凹中。每混匀一凹便取其
1 滴放入
同列的 2 排凹中，剩余稀释唾液应全部放回原凹中。
②在盛有不同稀释度唾液的第 2 排各凹中，均加入 4 滴缓冲液（ pH6.8）， 2 滴 1%的淀粉液
和 2 滴蒸馏水，用①混匀法充分混匀，置 37℃下 5min。