(第二章1)生物工业菌种
其他生物:
A: 担子菌(Basidiomycetes ):所谓的担子菌 就是人们通常所说的菇类(mushroom)生物。担子 菌资源的利用正愈来愈引起人们的重视,如多糖 (polysaccharide)、抗癌(anticancer)药物的开发。 近几年来,日本、美国的一些科学家对香菇的
抗癌作用进行了深入的研究,发现香菇中的“1,
放线菌(Actinomycetes)
放线菌因菌落呈放线状而得名。它是一个原核 生物类群,在自然界中分布很广,尤其在含有机质 丰富的微碱性土壤中较广。大多腐生,少数寄生。 放线菌主要以无性孢子进行繁殖,也可借菌丝 片段进行繁殖。后一种繁殖方式见于液体沉没培养 (submerged cultures)中。其生长方式是菌丝末 端伸长和分支,彼此交错成网状结构,成为菌丝体 。菌丝长度即受遗传性的控制,又与环境相关。
工业生产常用的细菌有 细菌(bacteria): 属于单细胞原核生物 ( unicellular prokaryote),以典型 的二分分裂(binary)方式繁殖。 细胞生长时,环状染色体 (chromosome)被复制,细胞内的 蛋白质等组分同时增加一倍,然后在 细胞中部产生一横段间隔,染色体被 分开,继而间隔分裂形成两个相同的 子细胞。 如间隔不完全分裂就形成链状细 胞。 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 乳酸杆菌(Lactobacillus lactics) 醋酸杆菌(Acetobacter) 棒状杆菌(Corynebacterium) 短杆菌(Brevibacterium)
获得性免疫缺陷综合症( acquired immunodeficiency syndrome, AIDS )
噬菌体(phage)是病毒的 一种。 Q:烈性噬菌体和温和噬菌 体概念与区别。 噬菌体在寄主细胞中的生长 繁殖过程可分为吸附、浸入、增 殖、成熟和释放。
C:藻类(alga): 培养螺旋藻,按干重计算每公顷可收获60吨,而种植 大豆每公顷才可获4吨;从蛋白质产率来看,螺旋藻是大 豆28倍。 培养珊列藻,从蛋白质产率计算,每公顷珊列藻所得 蛋白质是小麦的20-35倍。此外,还可通过藻类将CO2转 变为石油,培养单胞藻或其他藻类而获得的石油,可占细 胞干重得5%-50%,合成的油与重油相同,加工后可转变汽 油、煤油、和其他产品。 有的国家已建立培植单胞藻的农场,每年每公顷地培 植的单胞藻按5%干物质为碳水化合物(石油)计算,可 得60吨石油燃料。此项技术的应用,还可减轻因工业生产 而大量排放CO2造成的温室效应。 国外还有人从“藻类农场”获取氢能的报道,大量培 养藻类,利用其光合放氢作用来取得氢能。
原种(出发菌株)纯化斜面培养完全培养基 同步培养离心洗涤玻璃珠震荡分散过滤单 细胞或孢子悬浮液 活菌计数 诱变处理 诱变处理预备实验 处理液活菌计数 平板分离 形态变异并计算其变异率 斜面培养
诱 变 育 种
初筛、复筛 自然分离和再复筛 保藏及扩大试验
• 出发菌株的选择 • 诱变剂的选择 • 诱变操作及培养 • 突变株的筛选 • 突变高产基因的表现
其它防 衰 措 施
菌种的复壮 提供良好的环境条件 使用优良的保存方法 定期纯化菌种
二 、 菌种的复壮
通过分离达到复壮:菌落纯/细胞纯 在琼脂平板划线、涂布或与琼脂培养基 混合培养再分离,达到—菌落纯 采用单细胞或单孢子分离法达到—细胞 纯 通过寄主体达到复壮: 对于寄生性微生物的退化菌株,将菌株接种 到寄主细胞进行繁殖达到复壮。
种保藏不妥; 二是菌种生长的要求没有得到满足,或是遇到不 利的条件,或是失去某些需要的条件; 三是经诱变获得的新菌株发生回复突变,从而丧 失新的特征的情况。 连续传代是菌种退化的直接原因,这是由于菌种 经常处于旺盛的生长状态。 衰退菌株的特点:个体或群体特征发生变化;生 产能力降低;代谢能力降低;发酵周期延长;抗不 良环境能力降低。 1.
第二章 生物工业菌种与种子的扩大培养
第一节 工业生产常用的微生物 一、工业生产常用的微生物* ·从自然界中分离出来就能被利用;
·对野生菌株进行人工诱变,得到突变株才能被利用。 ·使用重组DNA技术改造的菌株
目前育种总趋势 从野生菌转向变异菌 自然选育转向代谢育种 从诱发基因突变转向基因重组的定向育种。
改变代谢通路的育种
改变代谢自动调节系统的育种
一、自然选育
采样 增殖培养 从自然界选育菌株 纯种分离 性能鉴定 从自发突变中选育菌株
二、诱变育种
按照生产的要求,根据生物的遗传和变异的理论, 用人工的方法造成菌种变异,再经过筛选、而达到 菌种诱变选育的目的。 诱变育种一般采用物理、化学诱变剂使微生物 DNA的碱基排列发生变化,以使排列错误的DNA模板 形成异常的遗转信息,造成某些蛋白结构变异,而 使细胞功能发生改变。
用于生产: 生产淀粉酶(amylase) 蛋白酶(proteinase) 乳酸(lactic acid) 醋酸(acetic acid) 氨基酸(amino acid) 肌苷酸(inosinic acid)
酵母菌(yeast) 酵母菌为单细胞真核生物( unicellular eukaryote),在自然界 中普遍存在,主要分布于含糖质较多的的酸性环境中,如水果、蔬菜、 花蜜(nectar)和植物叶子上,以及果园土壤中。石油酵母( petroleum yeast)较多地分布在油田周围的土壤中。 酵母菌大多为腐生,常以单个细胞存在,以发芽形式进行繁殖。母 细胞体积长到一定程度时就开始发芽。芽长大的同时母细胞缩小,在母 子细胞间形成隔膜,最后形成同样大小的两个细胞。如果子芽不与母细 胞脱离就形成链状细胞,称为假菌丝(pseudomycelium)。 工业上用的酵母菌有:啤酒酵母( Saccharomyces cerevisiae)、假 丝酵母(Candida)、类酵母(Saccharomycodes)等,用于酿酒(Brewing)、 制造面包、制造低凝固点石油、生产脂肪酶(lipase),以及生产可食 用、药用和饲料用酵母菌体蛋白等。
在筛选所需的菌种时应考虑的一些重要的指标: (1) 菌种的营养特征:
(2) 菌种的生长温度:
(3) 菌种对所采用的设备及生产过程的适应性: (4) 菌种的稳定性: (5) 产物的得率和产物的浓度: (6) 产物容易回收: 能满足(3)~(6),则有希望成为效益较高的生产菌种。
第二节 菌种的衰退、复壮与保藏
藻类工 厂
二、
微生物工业对菌种的要求
目前,随着微生物工业原料的转换和新产品的不断出现, 势必要求开拓更多新品种。尽管微生物工业用的菌种多种 多样,但作为大规模生产,对菌种则有下列要求:
(1) 廉价原料、生长迅速、目的产物产量高。 (2) 易于控制培养条件,酶活性高;发酵周期较短。 (3) 抗杂菌和嗜菌体的能力强。 (4) 菌种纯,不易变异和退化,不产生任何有害的生物 活性物质和毒素,保证安全生产。
如对芽孢杆菌(Bacillus),可先将菌液用沸水 处理几分钟,再用平板进行分离,从所剩下的孢 子中挑选出最优的菌体。 如果遇到某些菌株即使进行单细胞分离,仍 不能达到复壮的效果,则可改变培养条件,达到 复壮的目的。 如AT3.942栖土曲霉(Aspergillus terricola)的 产孢子能力下降,可适当提高培养温度,恢复其 能力。 同时通过实验选择一种有利于高产菌株而不 利于低产菌株的培养条件。
由于发酵工程本身的发展以及遗传工程的介入,藻类 (alga)、病毒(virus)等也正在逐步地变为工业生产用 的生物。
尽管如此,目前人们对微生物的认识还是十分不够的 。已经初步研究的不超过自然界微生物总量的10%左右。 微生物的代谢产物据统计已超过一千三百多种,而大规 模生产的不超过一百多种;
微生物酶有近千种,而在工业上利用的不过四五十种。 可见潜力是很大的。 在工业生产中常用的微生物主要有细菌、酵母菌、霉 菌和放线菌。
2 防止菌种衰退的措施
如果菌种已经发生退化,产量下降,则要进 行 分离复壮。 菌种的分离: 因为在菌种发生衰退的同时,并 不是所有的菌体都衰退,其中未衰退的菌体往往是 经过环境条件考验的,具有更强的生产能力。 因此,对于已衰退的菌株采用单细胞菌株分离 的措施,即用稀释平板法或用平板划线法,以取得 单细胞所长成的菌落(colony),再通过菌落和菌体 的特征分析和性能测定,就可获得具有原来形状的 菌株,甚至性能更好的菌株(strain)。
2-β -葡萄糖苷酶”及两种糖类物质具有抗癌作用。
B:病毒(virus)
其特点如下: 1. 形体微小,体积比细菌 小的多。 2. 没有细胞结构,是一种 独特分子的生物,主要由核 酸和蛋白质构成。 3. 营寄生生活,由于缺乏 独立代谢的酶体系,不能脱 离寄主而自行生长繁殖,有 专一性。
人类免疫缺陷病毒 ( human immunodeficiency virus ,HIV )
在液体沉没培养中由于搅拌器(agitator )的剪应力作用,常常形成短的分支旺盛的菌 丝体,或呈分散生长,或呈菌丝团状生长。它 的最大经济价值在于能产生多种抗生素( antibiotics)。从微生物中发现的抗生素,有 60%以上是放线菌产生的,如链霉素、红霉素 、金霉素、庆大霉素等。 常用的放线菌主要来自以下几个属:链霉 菌属、小单孢菌属和诺卡氏菌属等。
形态突变 高产突变 耐药性突变 营养缺陷型突变 结构类似物抗性突变
出发菌株(parent strain)选择应考虑的问题
出发菌株的稳定性: 选用具备优良特性的菌株: 挑选对诱变剂敏感的菌株: 注意菌株的生理状态及生长发育时间:
生长方式是菌丝末端的伸长和顶端分支,彼 此交错呈网状。菌丝的长度即受遗传性的控制, 又受环境的影响,其分支数量取决于环境条件。 菌丝或呈分散生长,或呈菌丝团状生长。
工业上常用的霉菌有: 藻状菌纲的根霉、毛霉、犁头霉,子囊菌纲 的红曲霉,半知菌类的曲霉、青霉等; 产品: