荧光样品
透射白光灯箱 （折叠于暗箱后面） ---用于蛋白胶的考染，银染的成像 透射紫外灯箱（双波长302nm/365nm) 核酸的染色：EB, SYBR Green, SYBR Gold等
（选配） 紫外－蓝光转换屏
用于激发GFP等荧光染料
DE-500 暗箱
Confidential 19
Western blotting化学发光检测
加入发光底物， 酶催化发光底 物发光。
HRP
Confidential
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Western blotting化学发光检测
X光片
CCD相机
二抗 一抗
发光底物 辣根过氧 化物酶
PVDF 膜
转膜
ＰＡＧＥ胶
电泳
Confidential 21
λmax = 562 nm
Confidential
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化学发光的原理
原理： 化学反应（或生物化学反应）的能量把体系中共存的某种 分子从基态激发到激发态，处于激发态的分子并不稳定， 在返回基态的过程中，将能量以光的形式释放出來。
A + B → C* + D C* → C + hυ
Confidential
一体化 基础型 凝胶成像系统 凝胶成像系统 Systems: AlphaImager Mini red
多功能 凝胶成像系统
AlphaImager EP
AlphaImager HP
FluorChem FC2
FluorChem HD2
FluorChem Q
Confidential
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Cell Biosciences 成像系统简述
客户最为认可的成像系统：耐用，好用， 软件方便又强大 用户遍及全国的高校，中科院，农科院，医学院和医院，CDC，CIQ等 占凝胶成像产品的市场份额约为20％（高端约25％，低端约10％）
Confidential
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成像系统的成像原理----硬件结构
CCD:电荷耦合器（Charge-Coupled Device）：核心，感 光， 转化电子； 像素，面积，位深，制冷，量子效 率。。。。。。 镜头：收集光线，传递光线；定焦/变 焦， 自动/手动， 光圈，焦 距。。。。
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常用的检测反应体系
HRP 和 AP体系
Horseradish Peroxidase
Luminol plus enhancers
Alkaline Phosphatase
1,2 Oxetane
Light
Alk Phos
Light
化学发光的底物不同： * 速度 * 稳定性 * 信号持续时间 * 信号强度
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基础凝胶成像系统 ---AlphaImager HP, red, AlphaImager Mini
Confidential
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AlphaImager HP凝胶成像系统
[定位]： 基础凝胶成像系统的最高端产品 -----高性能的，全自动的荧光和可见光成像系统 [应用范围]：用于荧光标记样品和可见光样品的成像检测: ---可用于检测DNA（EB, SYBR Green, SYBR Gold, SYBR Safe等染色）和 蛋白质（Coomassie Blue, Silver Stain等染色）凝胶; ---培养皿中的细胞; ---克隆板; ---薄层层析（TLC）板等
5.
应用：
很多的工作人员，大量的重复试验（使用简便） 确保每次照像的条件一致，确保试验的可重复性
Confidential 34
卖点二：多种激发光源可选
Confidential
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卖点二：多种激发光源可选
CCD相机
5个位置的滤光片轮
反射紫外 （选配） 反射紫外-蓝光转换屏
反射白光
（选配）反射紫外
用于TLC板或激发GFP荧光 染料 反射白光
暗箱：暗室，提供光源； 自动/手动， 透射/反射白 光， 透射/反射紫外，透 射/反射蓝光。。。。
CoБайду номын сангаасfidential
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成像系统的成像原理---图像采集
2. CCD把光转化成 电荷
3. 停止曝光
1. CCD采集生物样品 发出的光线
4. 电荷输出，转换成数字信号
5. 图像经过处理后，显示在显示屏上
Confidential
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Recognized by Our Customers
Over 10,000 Systems Installed Worldwide
Confidential
6
AlphaInnotech 在中国
Alpha Innotech2001年前后进驻中国，10年的历史 Alpha Innotech 在中国已经有超过800个凝胶成像系统的用户
[目标客户]：涉及到分子生物学实验的实验室。所有需要对氨基酸、多 肽、蛋白质、核苷酸、核酸等生物学样品进行分离、鉴定或提纯的实验室 都需要用到凝胶成像系统；
1.综合高校中部分院系：如生命科学院（细胞生物学，动物学，微生物学，发育生理学，神经，免疫）， 材料化学院，生物工程院；2 医学 院 ; 3.药学院 4.研究所：生物物理研究所，动物所，遗传与发育研究所，微生物所，放射研究所，军事医学研究所，生物工程研究所，5. 医院 ； 6.实验动物中心; 7.国家药物评定中心; 8.药厂等
Confidential
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卖点一：全自动镜头，全自动暗箱，AIC（自动图像捕获软件）
真正的自动对焦，Auto -Focus
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卖点一：全自动镜头，全自动暗箱，AIC（自动图像捕获软件）
使用简便：
1. 2. 3. 4. 用户设置曝光参数（光源，滤光片，镜 头焦距和光圈，曝光时间等） 作为一个程序保存（用户定义程序名） 通过下拉菜单调出和选择一个程序 “一键敲击”，软件根据程序的参数设 置，自动调整光源，滤光片，镜头焦距 和光圈，曝光时间等，自动对焦，完成 图像拍摄。 自动对焦功能－－软件具有自动成像反 馈功能，实时预览，根据成像的清晰 度，自动对焦，获得最清晰的图像
Cell Biosciences 成像系统培训
李迪
Confidential
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背景知识
了解AlphaInnotech 成像系统的成像原理 成像系统的应用范围 化学发光Western Blot
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}
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多色荧光Western Blot
Confidential
2
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了解AlphaInnotech的历史，了解其品牌优势
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基础凝胶成像系统
---AlphaImager HP, red, AlphaImaer Mini 化学发光成像系统 FluorChem E ,FluorChem HD2,
}
---- FluorChem FC3,
}
多色荧光、化学发光成像系统
--- FluoChem Q, FluorChem M
Confidential
Confidential
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AlphaImager HP凝胶成像系统的卖点：
1、全自动系统 自动的镜头，自动的暗箱，全自动成像软件 2、多样的荧光和可见光检测 透射和反射白光，透射和反射紫外，透射和反射蓝光 5个滤光片位置（红，黄，绿，蓝4个滤光片可选） 双波长（302和365nm）可推拉式紫外灯箱，紫外光强度高低 可调 －－可推拉式紫外灯箱，方便切胶操作 －－302nm紫外光能量高，适合用于荧光激发和拍照，365nm用 于观察和切胶，以及特定荧光染料的激发 可折叠的透射白光灯（非紫外－白光转换屏） －－使用方便（不使用时可以折叠到暗箱后面） －－白光灯透照均匀 3、功能强大的成像和分析软件 4、可升级成化学发光成像系统
Western blotting 能够检测蛋白质混合样品中的一种或者多种蛋白质
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• 化学发光Western Blot？
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化学发光原理
----自发光
化学反应发光：
Luciferin + ATP + O2
萤光素
luciferase
AMP + Oxyluciferin + hv
蛋白质常见检测方法 1、非特异检测 考马斯亮蓝/银染等
2、特异性检测 Western杂交（化学发光/荧光）
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Western Blot/蛋白印迹成像？
Confidential
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蛋白质检测 - Western Blotting
1. 凝胶电泳分离蛋白质
2. 蛋白质转印到膜上 3. 检测膜上的目的蛋白质
一抗和二抗都要剥脱
重新杂交
} } }
费时 在剥脱抗体的时候，很可能将目的蛋白也同时剥脱 定量是否准确
Confidential
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是否有其它解决方案呢？
如果在一张膜上，能同时检测多种蛋白？ • 省时 • 节省珍贵的样品 • 准确定量
化学发光 酶促反应 A + B Æ I* Æ Product + Light 荧光 直接检测 信号强度直接反应目的蛋白的量
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Recognized as a Leader In Imaging
“The 2008 Life Science Industry Awards” BioInformatics Inc.
Across the entire category, Alpha Innotech outperformed in the strength of its Customer value Score… the vast majority of scientists who nominated Alpha Innotech believed that the company’s products are highly capable of meeting their research needs….