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中毒症状和动物死亡情况观察
急性毒性试验的观察和记录内容主要包括4个方面：中 毒体征及发生过程、死亡情况和时间分布、体重和病理形 态学变化。
观察和记录中毒症状及出现的时间，死亡数量和时 间及死亡前的特征。急性毒性试验观察周期一般为14天， LD50或LC50计算时以观察周期内各组动物的总死亡数为依 据。根据观察情况分析中毒特点和毒作用靶器官。按照实 验结果，填写急性毒性实验记录表。
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经呼吸道急性毒性试验（LC50）
实验目的 学习静式呼吸道染毒操作方法 学习测定和计算LC50的试验步骤和方法。
实验原理（染毒方式） 呼吸道吸入染毒可分为两种方式，一种是动式
吸入，一种是静式吸入。
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静式呼吸道吸入染毒： 优点：设备简单、操作方便、消耗受试物少、适用于小动物 接触易挥发液 态化合物的急性毒性研究。 缺点：受试物浓度难维持恒定，而且实验动物有经皮吸收的 可能。
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敌敌畏（DDVP）配制：（组距1.4，给药量0.2ml/10g）
剂量mg/kg 原液量(g)
36.44
0.1139
原液量(ml)
（4℃）
0.0813
定容量(ml) 50
原液量 (ml)
（25 ℃ ）
0.0948
51.02
0.1594
0.1139
50
0.1327
71.43
根据实验动物中毒症状、死亡时间、特征 和LD50，按受试物种类，分别参照相应的经口 急性毒性分级标准进行评定，判断该受试物的毒 性大小及毒性特征。
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实验课所需准备的试剂和材料：
健康成年小鼠若干只（按每组5~6人，每组10只动物， ♂♀各半）、50 ml容量瓶(每组1个)、加样器（200μl、 1000μl）、加样枪头、DDVP原液、1 ml玻璃注射器、灌 胃针头（每组2套）、棉签、染液、LD50记录纸、小鼠笼 （每组2个）、电子天平（2台）、搪瓷托盘（每组一个）、 受试物、苦味酸酒精饱和液、0.5%品红溶液或其它染色 剂。
LD50计算（改良寇氏法）
改进寇氏法是利用剂量对数与死亡率呈S型曲线而设计 的方法，又称Karber法或平均致死量法。本法要求每个染 毒剂量组动物数要相同，各剂量组组距呈等比级数，死亡 率呈正态分布，最低剂量组死亡率呈<20%，最高剂量组死 亡率>80%。
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毒性分级及结果评定
动物选择及性别辨认
急性毒性实验一般首选哺乳动物，其中又以大小鼠最
为常用。大、小鼠主要依据肛门与生殖器之间的距离来区
分。远——♂、近——♀。成年鼠：雄性卧位可见睾丸， 雌性可见腹部有12个乳头。
动物称重、编号和随机分组
应依据统计学原则进行随机分组。
1 2 3 4 5 6 组数
1
只数
2
.
体重
.
1 82 79 3 64
经口急性毒性试验（LD50）
试验目的 学习急性毒性试验的实验设计原则 熟练掌握经口灌胃染毒操作技术 掌握LD50计算方法和急性毒性分级标准
试验内容 动物选择和性别鉴定 称重、编号和随机分组 小鼠经口灌胃操作技术 毒性症状观察、LD50计算和毒性分级
操作步骤
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0.2232
0.1594
50
0.1858
100
0.3125
0.2232
50
0.2603
140
0.4375
0.3125
50
0.3642
196
0.6125
0.4375
50
0.5099
灌胃操作
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将动物固定成垂直体位，腹部面向操作者，使动物的上消 化道固定成一直线
毒性作用/中毒症状和动物死亡情况观察
试剂
受试物（易挥发液体，苯（原液））、苦味酸 酒精饱和液、0.5%品红溶液或其当之处，请联系改正。
选择健康实验动物，称重（精确到0.1g），编号， 随机分组。
剂量分组
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呼吸道吸入染毒： 依设计剂量浓度及染毒柜体积，计算需要加入的受试物 量。将5♂、5♀共10只小鼠→放入静式染毒柜内→加盖 （注：每只小鼠每小时所需要的气积为3L）。将液态受 试物经加药孔加到接物蒸发器（纱布、滤纸、蒸发皿或小 型加热器）上→开启小电扇，计时→观察、记录中毒症状 和动物死亡情况。染毒结束后，关闭电源，打开盖子，驱 走柜内残存的含毒空气，取出动物，存活者归笼继续观察。 （症状：呕吐、昏迷、抽搐、呼吸麻痹而死亡） LC50计算：同LD50
急性毒性试验
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实验目的及意义： 确定受试物的半数致死剂量LD50/LC50、观
察受试物所致的急性中毒症状及其毒性作用特点， 为进一步的毒性试验提供重要的参考依据。
急性毒性试验的染毒方式可有多种，包括经 口、经呼吸道、经皮及注射染毒方式等。
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5
受试物剂量选择
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对于一种新的化学物质，剂量选择可参照同系物 的毒性或文献资料加以估计，先用少量动物以组距 较大的一系列剂量进行预实验，找出粗略的致死剂 量范围，然后再设计出正式实验剂量组
受试物配制
本次试验所用的受试物是80％的敌敌畏(DDVP)原液。 按照事先设计的剂量分别稀释配制为几种不同浓度的 受试物溶液，而各个剂量组的动物均给予相同单位体 重体积的受试化学物。
动式吸入： 优点：能即时补入新鲜空气和排出污浊空气，氧分压，二氧 化碳分压，温度、湿度，受试物浓度保持恒定。 缺点：设备复杂，消耗受试物多、易污染环境
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染毒柜内受试物浓度的计算
注意单位！
试剂和材料
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实验动物及器材
健康成年小鼠若干只，（每组10只，♂♀各 半），小鼠笼（每组2个）。静式吸入染毒柜6个、 吸管、动物秤、记录纸。
高剂量组动物的死亡常很快发生，染毒后应即刻密切观 察。观察和记录中毒症状及出现的时间，死亡数量和时间及 死亡前的特征。按照实验结果，填写急性毒性实验记录表。
中毒的症状观察：兴奋、流涎、肌震颤、抽搐、管状尾、 呼吸减慢、呼吸困难、四肢无力、站立不稳、大小便失禁、 大剂量侧卧以致死亡。
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