01.0目
01.1阐述干净室（区）空气中沉降菌检测操作规程，保证药物质量，防止生产环境对产
品污染，保证明验室环境达到检测产品规定。
02.0合用范畴
02.1合用于我司干净室（区）沉降菌监测和干净度级别验证。
03.0人员职责
测试人员对干净室（区）沉降菌测试。
04.0内容
04.1术语和定义
下列术语和定义合用于本规程。
04.1.1菌落：细菌培养后，由一种或几种细菌繁殖而形成细菌集落，简称CFU，通惯用
个数来表达。
04.1.2沉降菌：用GB/T16292- 提及办法收集空气中活性微生物粒子，通过专门培养基在
适当生长条件下系繁殖到可见到菌落数。
04.1.3沉降菌菌落数：规定期间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌数目，以cfu/皿表
达。
04.2测试原理：本测试办法运用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中生物粒子于培
养基平皿，经若干时间，在适当条件下让其繁殖到可见菌落数，以平板培养中菌
落数来评估干净环境内活微生物数，并以此来评估干净区干净度。
04.3监测周期：A级洁每次室验做监控，B级每周一次，C级每季度一次，D级每半年
一次监控。
04.4测试办法：
04.4.1使用设备与材料
高压灭菌锅：使用时应严格按照操作规程进行。
恒温恒湿培养箱：必要定期对培养箱进行校验。
培养皿：普通采用φ90mm×15mm培养皿。
培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）；已灭菌配制好培养基平皿放入30-35℃
恒温培养箱中培养72小时，若培养基平皿上确无菌落生生即可供采样用，制备好
培养基平皿应放在2-8℃环境中存储。
清洁剂：75%酒精
04.4.2测试时间：
（1）对单向流，如A级净化房间内及超净工作台，测试应在净化空调系统正常运营不少于10分钟后开始。
（2）对非单向流，如B级、C级、D级以上净化房间，测试应在净化空调系统正常运营不少于30分钟后开始。
（3）培养皿采样时间：静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；
动态测试时，培养皿暴露时间为不不不大于4小时。
04.4.3采样点数及其布置
（1）至少采样点数目：
（2）至少培养皿数
干净度级别所需φ90mm培养皿数（以沉降4h计）A级14
B级 2
C级 2
D级 2
（3）采样点布置
干净室（区）采样点布置宜力求均匀，避免采样点在局部区域过于稀疏。
下列多点采样采样点布置图示可作参照（见图1）
图1平面采样点布置图
A级单向流区域，干净工作台或局部空气净化设施采样点宜布置在正对气流工作面上，气流形式可参照图2、图3。
图2水平单向流气流形式
图3垂直单向流气流形式
①工作区采样点位置离地0.8m-1.5m左右（略高于工作台面）。
②取样时，应尽量避免在回风口附近取样（距离1m以上），且测试人员应在取样下风测，并尽量少走动。
可在核心设备或核心工作活动范畴处增长采样点。
取样时，取样设备会对
流产生干扰，取样时应避免也许对气流组织干扰。
04.4.4测试环节：
04.4.4.1采样办法
用无菌容器将预先培养培养基（无菌平皿）放至传递窗，紫外灯照0.5小时，
待检测用，将培养皿取出，用75%酒精擦平皿表面，放置在预先拟定取样点，
打开培养皿盖，使培养基表面暴露时间不少于30min，现将培养皿盖，盖后倒
置培养。
检测时记下培养皿打开起始时间和结束时间。
04.4.4.2培养：
所有采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
30℃-35℃培养，时间为
72小时。
每批培养基应有对照实验，检查培养基自身与否污染，可每批选定3个培养皿
做对照培养。
04.4.4.3菌落计数
用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，与否有漏掉。
若培养皿上有2个
或2个以上菌落重叠，可辨别时仍以2个或2个以上计数。
04.4.5注意事项
04.4.5.1测试用品要做灭菌解决，以保证测试可靠性、对的性。
04.4.5.2采用一切办法防止人为对样本污染。
对培养基条件及参数详细记录。
04.4.5.3由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时普通有透射光于培养皿背面或正面仔细
观测，不要漏计培养皿边沿生长菌落，必要时用显微镜别。
04.4.5.4采样前应仔细检查每个培养皿质量，如发现变质、破损或污染应剔除。
04.4.5.5测试状态
沉降菌测试前，温度在18℃-26℃，相对湿度在45%-65%，干净区与非干净
区和干净区与干净区之间静压差＞10Pa。
04.3.5.6测试人员
测试状态有静态和动态两种，并在报告中注明测试状态。
静态测试时，室内
测试人员不多于2人。
被测试干净区已消毒，测试人员必要穿戴符合环境干
净度级别工作服。
04.4成果计算
用计数办法得出各个培养皿菌落数。
平均菌落数计算见下式：
计算公式：
式中M为平均菌落数（CFU）
Mi表达1，2，3，……n号皿菌落数；n表达平皿总数。
04.5原则
干净度级别沉降菌平均菌落数（CFU/皿）以4小时计A级﹤1
B级 5
C级50
D级100
04.6成果评估
04.6.1每个测点沉降菌平均菌落数必要低于所选定评估原则中界限。
04.6.2在静态测试时，若某测点沉降菌落数超过评估原则，则重新测试两次，两
次测试成果均合格才干判为合格。
05.0附件
05.1REC：JY-001-01《沉降菌检查原始记录》
06.0参照文献
《药物生产质量管理规范》
《医药工业干净室（区）沉降菌测试办法》GB/T16294-
07.0变更记载。