［6］田玲，曾涛．基于SimRank的中药“效－效”相似关系挖掘［J］．计算机工程，2007，34（12）：242－244．［7］Jeh G，Widom J．SimRank：A Measure of Structural-context Similarity //Proc．of the8th ACM SIGKDD International Conference on收稿日期：2010－07－25基金项目：国家自然科学基金资助项目（90709003）作者简介：王刚（1985－），男，河北唐山人，硕士研究生，研究方向：中药系统生物学。
Knowledge Discovery and Data Mining［J］．Edmonton，Canada，2002，（7）：538－543．［8］Yin Xiaoxin，Han Jiawei，Yu P S．LinkClus：Efficient Clustering via Heterogeneous Semantic Links［C］//Proc．of the32nd Int'l Conf．onVery Large Data Bases'06．Seoul，Korea，2006（9）：427－438．［9］曾令明，唐常杰．双向关联规则挖掘及其相关性分析［J］．计算机工程与设计，2005，26（10）：2585－2588．［10］郭伟．基于FP－树的关联规则数据挖掘方法研究［D］．河北：燕山大学，2006．冠心病心血瘀阻证和心肾阴虚证的蛋白组学研究王刚1，姜民1，朱明丹2，崔佩佩1，杜武勋2，范应昌3，罗国安1，4（1．南开大学药学院，天津300071；2．天津中医药大学第二附属医院，天津300150；3．天津中医药大学，天津300193；4．清华大学生命科学与医学研究院，北京100084）摘要：目的：使用蛋白质组学技术对冠心病心血瘀阻证和心肾阴虚证这两种证候之间差异进行研究，以期找到两种证候间差异的物质基础并初步阐释两者差异的信号通路。
方法：采集冠心病心血瘀阻证和心肾阴虚证病人的血浆，用荧光差异蛋白电泳（2D－DIGE）、质谱（MALDI－TOF）等蛋白质组学技术分析和鉴定两种证候间蛋白表达的变化，并用生物信息学方法对其涉及的主要信号通路进行分析。
结果：蛋白组学研究发现冠心病心血瘀阻证和心肾阴虚证相比共有10种差异表达蛋白，其中7种表达上调，3种表达下调。
涉及的通路主要有补体和凝血级联通路及阿尔兹海默症信号通路。
结论：补体和凝血级联通路及阿尔兹海默症信号通路与冠心病心血瘀阻证和心肾阴虚证的中医分型有关，但需要进一步验证和机制研究。
关键词：冠心病；心血瘀阻证；心肾阴虚证；蛋白组学中图分类号：R541．4文献标识码：A文章编号：1000－1719（2011）03－0405－03Study on the Syndrome of Stagnant Blockade of Heart Blood and yin Deficiencyof Heart and Kidney of Coronary Heart Disease Through ProteomicsWANG Gang1，JIANG Min1，ZHU Ming-dan2，CUI Pei-pei1，DU Wu-xun2，FAN Ying-chang3，LUO Guo-an1，4（1．College of Pharmacy，Nankai University，Tianjin300071，China；2．Second Affiliated Hospital of Tianjin University of TCM，Tianjin300150，China；3．Tianjin University of Traditional Chinese Medcine，Tianjin300193，China；4．Institute of Biomedicine，Tsinghua University，Beijing100084，China）Abstract：Objective：To indentify specific protein markers for the syndrome of stagnant blockade of heart blood and yin defi-ciency of heart and kidney of coronary heart disease and interpret the pathway of the difference．Methods：The blood plasma sam-ples of CHD patient with the syndrome of stagnant blockade of heart blood and yin deficiency of heart and kidney were collected to identified the protein expressed differential between the two syndrome by proteomic techniques such as fluorescence differential in－gel electrophoresis（2D－DIGE）and MALDI－TOF，and then analysis major signaling pathway involved with Bioinformatics approach．Results：10proteins are detected differential between the patient with the two syndrome，7of all are up regulated and3 are down regulated．The primary pathways involved includ complement and coagulation cascades pathway and alzheimers disease pathway．Conclusion：It is proved that complement and coagulation cascades pathway and alzheimers disease pathway are related to differentiation for syndrome classification of syndrome of stagnant blockade of heart blood and yin deficiency of heart and kidney．But the conclusion needs further validation and mechanism studies．Key words：Coronary Heart Disease；stagnant blockade of heart blood；yin deficiency of heart and kidney；proteomics冠心病（CHD）是严重危害人类健康的常见病和多发病。
据世界卫生组织（WHO）网站公布的消息，2005年世界十大死因中冠心病无论在在高收入、中等收入还是低收入国家中均榜上有名。
虽然我国冠心病流行率仍属较低水平，但近年来发病率和死亡率有明显增加的趋势。
国家中医药管理局1994年发布的《中医病证诊断疗效标准》［1］将本病分为心血瘀阻、寒凝心脉、痰浊内阻、心气虚弱、心肾阴虚和心肾阳虚6型。
2002年修订的《中药新药临床研究指导原则（试行）》［2］将本病分为心血瘀阻、气虚血瘀、气滞血瘀、痰阻心脉、阴寒凝滞、气阴两虚、心肾阴虚、阳气虚衰等八个证型。
心血瘀阻证主要表现为胸部刺痛、绞痛，固定不移，痛引肩背或臂内侧，胸闷，心悸不宁。
唇舌紫黯，脉细涩。
心肾阴虚证主要表现为胸痛胸闷，心悸盗汗，心烦不寐，腰膝酸软，头晕耳鸣。
舌红少津，脉沉细数。
蛋白质组概念是由澳大利亚学者wilkins［3］及其同事于1995年首先提出的，如今蛋白质组学已成为寻找疾病分子标记和药物靶标最有效的方法之一，用蛋白质组学技术对中医辨证分型进行研究可在病证结合基础上探讨冠心病中医证型与临床客观检查指标的相关性，使中医辨证分型更加客观化与规范化，对于推广运用我国传统中医治疗冠心病起到积极地推动作用。
1资料与方法1.1临床资料病例于2008年1月－2009年1月期间收集自泰达国际心血管病医院。
于冠脉搭桥手术术前2天进行中医证候临床调查并进行辨证分型，符合纳入本项目研究标准的冠心病患者进行进一步实验。
其中心肾阴虚型和心血瘀阻型各6例。
1.2试剂与仪器试剂：蛋白质分析反应剂（protein assay reagent）均购自BIO－RAD公司；小样品研磨试剂盒（small sample grinding kit）、IPG13cm（pH3－10 NL）非线性胶条、DIGE3种染料（Cy2TM，Cy3TM，Cy5TM）均购自GE healthcare公司。
无水乙醇、乙酸等常用试剂均为国产分析纯。
仪器：电泳仪（SE－600全套电泳设备，Amersham 公司），光密度扫描仪（GS－710，Bio－Rad公司），Ty-phoon扫描仪和DeCyder图谱分析软件（GE healthcare 公司）；质谱检测仪器型号：LTQ（Thermo Finnigan，San Jose，CA）。
1.3标本采集对符合纳入标准的患者在术前（术前准备过程中，患者血液尚没有肝素化）对其进行静脉取血2mL，静置15min，以3000r/min，离心15min，提取血清，放入无菌冻存管，于－80ħ保存，用于接下来的蛋白组学研究。
1.4去除白蛋白的血浆样品制备血清样品化冻后，各取1mL样品，4ħ12000g离心，吸取中间层，除去上层的油脂。
稀释后用0．22μm滤膜过滤，然后用Agi-lent Multiple Affinity Removal Column处理去除高丰度蛋白。
1.5使用Bradford法对蛋白质进行定量，并进行Cy2，Cy3，Cy5标记。
1.6双向电泳将分别用Cy2，Cy3，Cy5标记的样品加到同一EP管中，振荡混匀，点动离心。
同时设置内标，加入等体积的2ˑSample buffer，冰浴10min。
进行IEF与SDS－PAGE。
电泳结束后采用硝酸银染色方法染色。
1.7扫描及凝胶图像分析使用Typhoon扫描仪和eCyderTM v6．5软件（GE Healthcare，USA）进行扫描、获取图像并进行分析。