南方医科大学生物化学实验报告
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专业年级：
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生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称Folin-酚试剂法测定蛋白质含量
实验日期实验地点
合作者指导老师
评分教师签名批改日期
格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。

需强调的地方请用蓝颜色标出。

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一、实验目的
1、学习并掌握肝糖原提取和鉴定原理和方法；
2、学习并掌握蒽酮比色测定糖原含量的原理、注意事项和操作方法；
3、学习并掌握刻度吸管和微量加样枪的使用方式；
4、正确掌握使用离心机的方法步骤；
5、熟练运用溶液混匀的各种方法；
6、正确掌握溶液转移的操作；
7、正确掌握使用分光光度计的方法步骤
二、实验原理
实验1肝糖原的提取与鉴定
糖原是生物的主要储能物质之一，主要储存与肝细胞中，采用研磨匀浆等方法可以使肝细胞破碎。

肝细胞破碎，细胞内容物流出。

低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝
组织中的酶并且使蛋白质沉淀，糖原则能够稳定地保存在上清液中，从而达到分离糖原与蛋白质等其他成分的目的。

糖原不溶于乙醇但可溶于热水，故可以先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。

糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。

这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。

此外，糖原还可以被酸水解成葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可以判定肝组织中糖原的存在。

糖原水解溶液与班氏试剂混匀沸水浴加热2min后会出现砖红色沉淀。

CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4 + Cu(OH)2↓
2Cu(OH)2 + C6H12O6 = 2CuOH +氧化型葡萄糖+ H2O
2CuOH = H20 + Cu2O↓ (红色)
Cu(OH)2 ==== H2O + CuO↓ (黑色)
实验2肝糖原定量测定
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故可将肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，保留肝糖原。

糖原可以被浓酸水解成葡萄糖，而浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成5-羟甲基呋喃甲醛，该化合物与蒽酮脱水缩合可以生成蓝色的化合物。

该物质在620nm处有最大吸收。

糖含量在10-100μg，溶液颜色的深浅与可溶性糖的含量成正比。

利用该反应原理处理标准葡萄糖溶液，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。

三、材料与方法：以流程图示意
1、实验材料
（1）肝糖原的提取与鉴定
样品：1.50g的鸡肝
试剂：5%三氯醋酸溶液、95%乙醇、蒸馏水、浓HCl溶液、50%NaOH溶液、碘试剂和。