产物的影响而发生密度抑制
（三）停滞期： 即细胞数量达到饱和密度后，细胞 与营养液的交换面积减少，代谢产物积 累，pH下降细胞停止增殖，进入停滞期。 在此时应及时进行传代，否则因细胞 中毒受损，大量细胞出现死亡，至少再 传1-2代后，细胞才能恢复。
细胞的传代培养操作
1、悬浮细胞
可采用加入等量新鲜培养基后直接吹
（二）指数生长期：
细胞增殖最旺盛时期，一般用细胞 分裂指数（Mitotic index，MI）表示， 即细胞群中每1000个细胞中的分裂相数。
体 外 培 养 细 胞 分 裂 指 数 介 于 0.10.5%，且受细胞种类培养液成分、pH、 温度等影响。
指数生长期是细胞活力最好的时期，可对 细胞进行各种实验 指数生长期持续3-5d后，随细胞数量不断 增多，生长空间日趋减少，细胞相互接触 汇合成片，呈现接触抑制。而恶性细胞则 无接触抑制现象。 癌细胞则由于营养成分的消耗和细胞代谢
刚加入
合适
过头
4、加入1～2滴管含有血清的培养液，反
复吹打细胞，使其成细胞悬液。
5、以1：2或1：3进行分装，补充新鲜培
养基，并在培养瓶上做好标记，注明代号、
日期，轻轻摇匀，37 ℃CO2培养箱培养。
6、观察：细胞培养24h后，即可观察培养
液的颜色及细胞的生长情况。
注意事项
1．传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间 的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。 每次最好只进行一种细胞的操作。每一种细胞使
所谓细胞“一代”，即从细胞接种到分离再培养 的一段时间。如某一细胞系为50代即该细胞已传 代50次。
贴壁细胞的生长规律
贴壁过程
培养细胞一代生长过程
（一）潜伏期（Latent phase）： 细胞从接种到贴壁生长繁殖的一段 时间。 二倍体细胞该期时间长（24-96h） 连续细胞系时间短（10-30min）
用一套器材。培养用液应严格分开。
2．传代时间的掌握：每天观察细胞形态，掌握
好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，
折光性好，生长致密时即可传代。 3、消化时间的掌握
思考题
1.试述传代培养的步骤和注意事项，并指出 哪些是关键步骤?
2.细胞胞传代培养的目的是什么? 3.贴壁细胞和悬浮细胞传代方法上有什么不 同? 4.如何估计是否传代和传代的方式?
细胞的传代培养
本次课内容
复习细胞原代培养基本知识 细胞生长的规律 重点：细胞传代培养的操作过程 操作：HepG-2细胞的传代
原代培养
什么是原法的主要过程
细胞传代培养
概念：培养的细胞由于细胞增殖，数量增加，细 胞难以继续生长繁殖，需要进行分瓶培养，将培 养的细胞分散，以1:2或l:3以上的比率转移到另 外的容器中进行培养，即为传代培养，也叫做继 代培养 一般细胞可传代10-50代。
打分散进行传代，或用离心法后，加入新
培养基后再吹打分散进行传代 2、贴壁细胞（重点）
贴壁细胞传代培养过程
1、实验准备：细胞培养用的器材灭菌、超净工作 台准备、实际预温、操作人员准备。
2、倒去瓶中的旧培养液，加入2～3ml的D-Hanks 液，轻轻振荡漂洗细胞，以除去悬浮在细胞表面的 碎片。 3、加入2滴管0.25％胰蛋白酶消化液，消化2～ 3min，倒置显微镜下观察，待细胞单层收缩突起 出现空隙时，倒去酶液。