由于参与本反应的各种成分间有着一定量的关系，因此在作本试验之前，必须通过一系列的预备实验来确定各成分的使用量，故本反应 的实验方法较为复杂。
本次实验以伤寒杆菌免疫血清与其相对应的抗原补体结合试验为例。
材料：
1. 抗原：伤寒的抽出液 2. 抗体：伤寒杆菌的免疫血清 3. 补体：豚鼠血清 4. 溶血素：抗绵羊血细胞的兔血清 5. 2%绵羊红血球 6. 小试管、试管架、水浴锅。 方法： （一）预备试验（示教说明） 预备试验包括溶血素效价的滴定，补体效价的滴定，抗原效价的滴定及被检血清的处理。 （1） 溶血素效价的滴定 按照下表加入各物
（2） 补体单位滴定 依下表加入各试剂：
管
补体
抗原
置
溶血素
置
生理盐水
2%羊血球悬液（ml）
(ml）
号 (1：20)（ml） (ml）
于 (2 单位）（ml）
于
1
0.20
0.5
1.30
0.5
2
0.25
0.5
1.25
37
0.5
0.5
0.5
37
3
0.30
0.5
1.20
0.5
℃
4
0.35
0.5
1.15
0.5
实验四 溶血反应和补体结合试验
一．溶血反应
免疫血清与其相应的抗原细胞（血球、细菌及其组织细胞相遇，并在补体的参与下可出现溶细胞反应。依抗原、抗体的种类不同可有溶 血反应、溶菌反应等。
溶菌反应只在某些细菌中出现（如霍乱弧菌）。应用溶血反应是补体结合反应中不可少的因素。溶血反应是由于抗原（红血球）和抗体 （溶血素）进行特异性的结合，并吸着了补体，而使红血球在补体的作用下被溶解，于是产生了溶血现象。
材料：
1.
抗原：2%绵羊红血球。
2.
抗体：溶血素
3.
补体：取健康豚鼠血清作为补体。
4.
小试管、生理盐水、水浴箱。
方法：
1．取小试管 3 只，按下表加入各物（容量单位为毫升）
试管 2%红血球 溶血素（2 单位） 补体（2 单位） 生理盐水
1
0.5
0.5
0.5
0.5
2
0.4
0.5
——
1.0
3
0.5
——
0.5
（3） 抗原的滴定
在用已知抗原测定未知抗体时，必须先滴定抗原效价以决定本试验时所需抗原的最适浓度（反之用已知抗体测定未知抗原时，则需滴定 抗体效价）
试
管
号
1
2
3
4
5
6
剂 1：5 稀释血清
伤寒抗原 2U 痢疾抗原 1：80
补体 2U 生理盐水
溶血素 2U 2％羊血球
说明
0.5
0.5
0.5
－
0.5
－
－
0.5 ℃
0.5
5
0.40
0.5
1.10
水
0.5
6
0.45
0.5
1.05
0.5
0.5
水
0.5
7
0.50
0.5
1.00
浴
0.5
0.5
浴
45
8
-
0.5
1.50
0.5
分钟
15 0.5
分钟
结果
不溶血 稍溶血 全溶血 全溶血 全溶血 全溶血 全溶血
不溶血
能引起完全溶血的最小补体量称为准确单位，上表中第 3 管（即 0.3 毫升），但因补体的效价可能有部分损失，故普通稍高的一管为实用 单位，实际试验时须用两个实用单位。 上表的结果为： 补体标准单位：0.3 毫升 补体实用单位：0.35 毫升 补体两个实用单位：0.70 毫升 因试验时是两个实用单位的补体 0.5 毫升，可依下列比例关系换算： 20：0.7=ⅹ：0.5 ⅹ= 14.3 即须将补体稀释 14.3 倍，用 0.5 毫升则含有两个实用单位。
1.0
结果
2．将上述 3 试管放在 37℃水浴箱内 15—30 分钟观察有无凝血现象。
二．补体结合反应
当抗原与其对应的抗体结合时，所生成的抗原抗体复合物能从溶液中将补体吸着此即谓补体结合。参与补体结合反应的抗原是透明的溶 液，故补体结合现象不能被肉眼看出来，因此必须借助溶血系统（溶血素及相对应的羊血球）作为指示剂，来判定媒质中有无游离的补 体，近而推定媒质中未知抗原（或抗体）和已知抗体（或抗原）是否进行了特异性的结合。本反应具有很高的敏感性及特异性，因之常 应用于传染病的诊断，特别诊断病毒疾病和梅毒。
摇匀 全溶解
后置 全溶解
37℃ 全溶解
水浴 一小 时
全溶解 全溶解 全溶解
全溶解
全溶解
全溶解
凡最高稀释度的溶血素可呈现完全溶血者为一个单位。依上表结果第 10 管（即 1：4000 倍稀释）0.5 毫升溶血素为一个单位，在溶血反 应中常用 0.5 毫升中含有 2 个溶血素单位的溶液，所以试验时应取 1：2000 倍稀释的溶液。
1：20
生理
2%羊血球
（ml） 补体（ml） 盐水（ml）
0.3
1.7
0.5
0.3
1.7
0.5
0.3
1.7
0.5
0.3
1.7
0.50.31.7源自0.50.31.7
0.5
0.3
1.7
0.5
0.3
1.7
0.5
0.3
1.7
0.5
0.3
1.7
0.5
0.3
1.7
0.5
0.3
1.7
0.5
0.3
2.2
0.5
假定结果
管号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 对照
溶血素 （ml）
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
溶血素
稀释倍数 1：300 1：500 1：800 1：1000 1：1200 1：1600 1：2000 1：2400 1：3200 1：4000 1：4800 1：6000 1
0.5
－
0.5
－
－
0.5
0.5
0.5
0.5
－
－
0.5
0.5
摇匀放置 37℃水浴中 30min
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
摇匀放置 37℃水浴中 15min
试验管
特异性对 照
血清 对照
抗原 对照
－
－
－
－
－
－
0.5
0.5
1.0
1.5
0.5
－
0.5
0.5
溶血素对 羊血球对
照
照
如血清对照管呈完全或部分不溶血是为抗补体现象。血清严重污染细菌，混有淋巴液或显著溶血时，常产生很强抗外体作用。又如试管、 吸管不清洁，也可出现抗补体。若有抗补体发生，应抽血重试验。