细胞计数
一、实验目的
a)1、掌握血球计数板的正确使用方法及技巧。

b)2、掌握用血球计数板计算细胞浓度的原理及方法。

二、实验原理
a)计数室容积一定，只要将适宜浓度的待测细胞悬液加入计数室并在显微
镜下计数就可算出单位体积内的细胞总数目。

b)血球计数板的计数室结构：大小：3.0mm×3.0mm。

分区：9个边长1.0mm
的正方形区；其中四周和中央区为计数区，称之为一个大方格。

中央大
方格用双线围成中方格；中方格内再用单线划分成小方格。

四周大方格
由单线围成中方格。

c)血球计数板的规格：第一种：中间大方格组成为16×25（16个中方格，
每个中方格内25个小方格）＝400。

第二种：中间大方格组成为25×16
（25个中方格，每个中方格内16个小方格）＝400
d)计数板上标识数目含义：1/400mm2：中间大方格共有400个小方格，每
小格面积为1/400mm2。

0.1mm：计数板底部到盖玻片的高度。

三、实验仪器及试剂
a)材料：1/1000稀释的抗凝鸡血或绵羊血
b)试剂:肝素钠溶液,0.9%氯化钠
c)用品：普通显微镜、血球计数板、计数用盖玻片、10μL枪及枪头、酒
精棉球、吸水纸等。

四、实验步骤
a)清洁计数板及盖玻片：先用水洗，再用（70%）酒精棉球擦
b)镜检计数室：加盖片一起观察是否干净、格子是否清晰
c)样品浓度检查：加样显微观察，以每小格不超过4~5个细胞为宜，否则
应进行稀释
d)样品稀释：等渗盐水
e)加样：先加盖玻片，再加样；样加在盖玻片边缘，毛细作用吸入
f)选择计数区域：2个或4个周围大方格或全部格子。

g)计数：压线细胞不重复计数
h)计算原始细胞样品浓度：个/mL或个/L
i)清洗计数板
五、实验结果
六、实验分析
经过两次计数的统计及平均，最后得到的菌液浓度为3.85*10^6个每毫升。

七、实验注意事项
a)准确稀释及混合细胞样品。

b)计数板要清洁。

c)加样量要准确。

d)计数要准确。

每个样品至少计数2次，结果取其平均值；2次计数误差
不应大于10%。

e)压线细胞不能重复计数。