基因工程原理练习题及其答案一、填空题1．基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。
2．基因工程的两个基本特点是：(1)____________，(2)___________。
3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和__________。
4．碱裂解提取溶液I中的葡萄糖的作用________________、_______________、______________________________。
5．同一质粒不同构型在电泳过程中迁移速率为。
6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。
7．第一个分离的限制性切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性切核酸酶是_____________。
8．限制性切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。
9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性：(1)____________；(2)________________的活性。
10．为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。
11．EGTA是____________离子螯合剂。
12．测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。
13．切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。
14．欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。
15．反转录酶除了催化DNA的合成外，还具有____________的作用，可以将DNA- RNA杂种双链中的___________水解掉。
16．基因工程中有3种主要类型的载体：_______________、_____________、______________。
17．就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：_______________、_____________、______________。
另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。
18．琼脂糖凝胶的分辨力与胶浓度的关系是。
19．如果改变反应条件就会影响酶的专一性和切割效率，称为________________。
20．影响限制性切酶活性的因素________________、________________、________________、________________。
21．连接反应的实用温度为________________。
22．pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。
pUC系列的载体是通过和两种质粒改造而来。
它的复制子来自，Amp 抗性基因则是来自。
23．噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是；二是。
24．野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是和。
25．黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子来自、COS位点序列来自，最大的克隆片段达到kb。
26．野生型的λ噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：(1)(2) (3) 。
27．噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是，而来自噬菌体的主要结构是。
28．λ噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA片段后，总的长度应在噬菌体基因组的的围。
29．在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目的是。
30．用乙醇沉淀DNA时，通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子，如NaCl和NaAc，其目的是。
31．引物在基因工程中至少有4个方面的用途：(1) (2)(3) (4) 。
32．Clark发现用T aq DNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端，而是有一个突出碱基末端的双链DNA分子。
根据这一发现设计了克隆PCR产物的。
33．在cDNA的合成中要用到S1核酸酶，其作用是切除在。
34．乙醇沉淀DNA的原理是。
35．假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件：(1)________________________________ (2)_____________________________(3)_________________________________。
36．受体细胞的感受态是___________________________________。
37．DNA重组连接的方法大致分为四种：(1)_____________(2)_______________(3)___________________________(4)___________________________。
38．将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个___________，各种此类质粒的集合体称之为构建了一个_________________。
39．将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称作一个____________，源于同一批RNA制备物的克隆群则构建了一个_________________。
40．只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用___________可以将这段DNA 进行百万倍的扩增。
41．人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为___________时吸附DNA, ___________时摄人DNA。
42．目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。
大致可以分为：(1)_______________(2)_______________(3)___________________(4)____________________________等。
43．PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于___________________________。
44．核酸杂交探针可分为两大类：DNA探针和RNA探针。
其中DNA探针又分为__________ 探针和__________________探针。
45．RNaseH的活性为________________________________________________ 。
46．第一个用于基因克隆的天然质粒。
47．噬菌粒载体的包装需要________________的帮助下才能完成。
48．cDNA文库的特点：、、、。
49．用________________处理大肠杆菌，能增加膜的通透性。
50．在________________技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的DNA探针杂交。
51．可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有____________和_______的活性。
52．根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素：(1)_______________(2)________________________(3)______________________。
53．Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别：(1)_______________________________________________________________________(2)_______________________________________________________________________。
54．外源基因导入植物细胞的方法有：。
答案1．702．(1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达3．克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择4．增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械力（震荡）的作用而降解。
5．超螺旋大于线性大于开环。
6．(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积7．EcoK；EcoRl8．GGCC；异源同工酶9．枯草杆菌蛋白酶；(1)5'-3'合成酶的活性；(2)3'-5'外切核酸酶10．碱性磷酸酶；5’端的磷酸基团11．Ca2+12．5'-3'合成；3'-5'外切13．DNA聚合酶I：5'一3'外切核酸酶；5'一3'合成酶14．S1核酸酶切割；DNA聚合酶补平15．核酸水解酶H；RNA16．质粒DNA；病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体17．复制区：含有复制起点；选择标记：主要是抗性基因；克隆位点：便于外源DNA的插入18．正比19，星号（*）活性20．DNA的纯度、DNA的甲基化程度、温度、缓冲液(Buffer)21. 4~16 ︒C22．pBR322和M13；pMBl；转座子23．它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增；对某些噬菌体(如λ噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽24．没有合适的限制性切核酸酶识别位点；选择标记25．质粒；λ噬菌体；4526．(1)分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记27．复制区；IG区28．75％～105％29．螯合Mg2+离子，抑制核酸酶的活性30．中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力31．(1)合成探针；(2)合成cDNA；(3)用于PCR反应；(4)进行序列分析32．T—载体33．第二链合成时形成的发夹环•34．乙醇使DNA分子脱水35．(1)保持正确的可读框(2)能够使其转录的启动子(3)具有翻译的起始和终止信号36．接受外源DNA的生理状态37．(1)黏性末端连接；(2)平末端连接；(3)同聚物接尾连接；(4)接头连接法38．基因组DNA克隆；基因组DNA文库39．cDNA克隆；cDNA文库40．聚合酶链式反应(PCR)41．0︒C；42︒C42．(1)遗传学方法；(2)物理筛选法；(3)核酸杂交法；(4)表达产物分析法43．插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选44．基因组DNA；cDNA45．5’→3’或3’→5’方向特异地水解RNA-DNA杂交双链中的RNA链46．pSC10147．辅助噬菌体48．（1）不含含子序列。
（2）可以在细菌中直接表达。
（3）包含了所有编码蛋白质的基因。
（4）比DNA文库小的多，容易构建49．CaCl250．Southern印迹51．5’→3’合成酶；3’ →5’外切核酸酶52．(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表达载体；(3)不含含子53．(1)印迹的对象不同：Northern是RNA，Southern是DNA；(2)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件54．叶盘法、电击法、基因枪法二、选择题(单选或多选)1．因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是( )(a)A．Kornberg (b)W．Gilbert (c)P．Berg (d)B．McClintock2．第一个作为重组DNA载体的质粒是( )(a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl83．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。