(2)使用高压锅灭菌 ,计时时间不是高压锅通电后 ,而是有压力后 开始计时灭菌 15 min;灭菌结束 ,不是灭菌锅压强降为 0停止,而是与 大气压相同时打开锅盖。
(3)对于培养基 pH的调节,需在灭菌之前。 (4)检测培养基灭菌是否彻底 ,最简便的方法是空白接种 ,即将未 接种的培养基放在适宜温度下培养一段时间后观察是否有菌落生 长,若培养基中出现菌落 ,说明培养基灭菌不彻底或被污染 ,反之说 明培养基灭菌彻底。
选考提升
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题型三 大肠杆菌的培养与分离操作
典例精析 3(2017浙江温州期末 )生活饮用水的微生物安全性日常检
测是很重要的。请回答下列问题。
(1)检验大肠杆菌的含量时 ,通常将水样用
(液体)进行
一系列的梯度稀释。将稀释后的水样分别用
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特色梳理
选考提升
知识强化 教科书灭菌方式的归纳
灭菌 适用材 方法 料或用具
灭菌条件
灭菌时间 灭菌后处理
高压 蒸汽 灭菌
培养基、 玻璃器 皿等
121 ℃,1 kg/cm2 压力(若培养基中 含有葡萄糖,防止 其碳化,90 ℃以 上,500 g/cm2 压力)
15 min(若 含有葡萄 糖,灭菌时 间 30 min)
酸碱性
要求在中性偏碱 的环境中生长
要求在中性偏酸 的环境中生长
特色梳理
选考提升
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(2)常见无菌操作 a.对于培养皿、试管、三角瓶、镊子等常采用 高压蒸汽灭菌 法 灭菌。 b.对于不能加热灭菌的化合物 ,如尿素等 ,只能用G6玻璃砂漏斗 过 滤。 c.实验操作过程中 ,一般采用 灼烧对接种环和玻璃刮刀进行灭菌。 d.为避免周围环境中微生物的污染 ,实验操作应在 酒精灯火焰旁 进行。
保存。
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特色梳理
选考提升
题型一 无菌操作
典例精析 1下列有关高压蒸汽灭菌的叙述 ,错误的是 ( A )
A.用于分离微生物的土壤样品必须高压蒸汽灭菌
B.灭菌前要将培养皿用牛皮纸或报纸包扎 C.为达到良好的灭菌效果 ,一般在压力为 1 kg/cm 2,温度为121 ℃的 条件下,维持15 min
D.当灭菌锅压力与大气压相同时 ,可以打开锅盖将灭菌物品拿出来 解析 用于分离微生物的土壤样品不能使用高压蒸汽灭菌 ,否则 会导致样品中微生物全部死亡 ,而分离不到微生物 ,A项错误;灭菌 前要将培养皿用牛皮纸或报纸包扎 ,B项正确;为达到良好的灭菌效 果,一般在压力为 1 kg/cm2,温度为121 ℃的条件下 ,维持15 min,C项 正确;当灭菌锅压力与大气压相同时 ,即灭菌锅内没有压力了 ,可以 打开锅盖将被灭菌物品拿出来 ,D项正确。
↓
次,在固体培养基的平板上连 续划线,盖好培养皿
划线分离 培养皿倒置(盖在下面),放在 37 ℃恒温培养箱中
↓
培养 12~24 h 后,可看到划线的末端出现不连续的
培养观察 单个菌落
↓
无菌条件下,将单菌落用接种环取出 ,再用划线法
菌种保存 接种在斜面上,37 ℃培养 24 h 后,置于 4 ℃冰箱中
养基的表面进行培养。在稀释 度足够高的菌液里 ,聚集在一起
分离到由一个细胞繁殖 的微生物将被分散成单个细胞 ,
而来的肉眼可见的细胞 从而能在培养基表面形成单个
群体,即菌落。
的菌落
特点 方法简单,但不适宜计数 单菌落更易分开,但操作复杂
目的 使培养基上形成单个细胞繁殖而来的子细胞群体 ——菌落
特色梳理
灭菌时间
G6 玻璃砂漏斗过 尿素滤液滤来自过滤完毕灭菌后处理
玻璃砂漏斗 用 1 mol/L 的 HCl 浸泡,抽 滤去酸后蒸 馏水洗至中 性,干燥后保 存
特色梳理
选考提升
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易错警示 (1)若配制的培养基中有葡萄糖 ,为防止葡萄糖分解碳化 , 一般要用 500 g/cm2压力(90 ℃以上)灭菌30 min;不能加热灭菌的化 合物,如尿素等 ,只能用G6玻璃砂漏斗过滤。
专题22 微生物的利用
考纲要求
考试内容 1.大肠杆菌的培养和分离 2.分离以尿素为氮源的微生物
考试要求 选考
实验与探究能力
特色梳理
选考提升
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大肠杆菌的培养和分离
1.培养基及无菌技术 (1)微生物对培养基的需求
微生物类型 细菌 霉菌
培养基配制特点 用蛋白胨和酵母提取物来配 制,还要加入一定量的 氯化钠 以维持一定的渗透压 用无机物配制或添加 蔗糖的 豆芽汁即可
实验用具在 60~80 ℃烘 箱中烘干 ;培 养基冷却待 用
接种环、
灼 烧 灭 菌
接种针 或其他 金属用 具;玻璃
在酒精灯火焰的 充分燃烧层灼烧
烧红;玻璃 刮刀上的 酒精燃尽
防止过热杀 死目的菌种 , 冷却后使用
刮刀
特色梳理
选考提升
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灭菌 适用材 方法 料或用具
过 滤 尿素培 灭 养基 菌
灭菌条件
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特色梳理
选考提升
知识强化 划线分离和涂布分离操作比较
项目 划线分离法
涂布分离法
工具 接种环
玻璃刮刀
通过接种环在琼脂固体 将菌液进行一系列的梯度稀释 ,
培养基表面连续划线的 然后用玻璃刮刀将不同稀释度
操作,将聚集的菌种逐步 的菌液分别涂布到琼脂固体培
原理
稀释分散到培养基表面。 在数次划线后培养 ,可以
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特色梳理
选考提升
2.大肠杆菌的培养和分离的实验操作
50 mL LB 液体培养基和 50 mL LB 固体培养基及
培养基灭 培养皿高压蒸汽灭菌
菌
将固体培养基分别倒入 4 个灭菌后的培养皿中 ,水
↓
平放置,使之形成平面
倒平板 在装有液体培养基的 三角瓶中接种大肠杆菌,培养
↓
12 h
接种
用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一
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特色梳理
选考提升
题型二
划线分离与涂布分离操作比较
典例精析 2划线分离和涂布分离是纯化微生物的两种常用方法 , 下列描述正确的是 ( D )
A.都要将菌液进行一系列的梯度稀释 B.划线分离是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表 面连续划线的操作 C.涂布分离是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养 D.都会在培养基表面形成单个的菌落 解析 划线分离不需要进行梯度稀释 ,A项错误;划线分离不需要 进行梯度稀释 ,划线分离是将菌液通过接种环在固体培养基表面连 续划线的操作 ,B项错误;涂布分离是将不同稀释度的菌液涂布到固 体培养基的表面 ,C项错误;划线分离和涂布分离都能在培养基表面 形成单个菌落 ,D项正确。