文章编号 ： １ ０ ０ ８ １ ５ ３ ４ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ２ — ０ １ ３ ４ ０ ５
混 合 藻 中蓝藻 的检 测
崔 建 升 。 ， 康 红 利
（ １ ． 河 北科技 大 学环境 科 学与 工程 学院 ， 河 北 石 家庄
河北石 家庄 ０ ５ ０ ０ １ ８ ）
０ ５ ０ ０ １ ８ ； ２ ． 河北省 污 染防 治生物技 术 实验 室 ，
摘 要 ： 利 用 荧光 光谱技 术 ， 以铜 绿微 囊 藻活体 、 藻蓝 蛋 白提 取 液 以及 叶绿素 ａ 提 取 液 为测试 对 象，
进 行 了荧光 光谱 的扫描 ， 并 且 研 究 了 不 同 藻 种 对 铜 绿 微 囊 藻 藻 蓝 蛋 白 荧 光 强 度 的 影 响 。 研 究 结 果
波 长／ ｎ ｍ
主要使 用荧 光分 光 光度 计 （ Ｐ Ｆ 一 ５ ３ ０ １ Ｐ Ｃ， 日本 岛
图１ 藻 蓝 蛋 白 与 叶 绿 素 ａ激 发 发 射 波 长 对 比
Ｆｉ ｇ．１ Ａｌ ｇａ ｌ ｂ ｌ ｕ ｅ ｐｒ ｏｔ ｅ ｉ ｎ ａ ｎｄ ｃ ｈｌ ｏｒ ｏｐ ｈｙｌ ｌ ａ ｅ ｘ ｃ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｏｎ
表明， 测 定铜 绿微 囊 藻的检 测波 长为 ５ ９ ０ ｎ ｍ／ ６ ５ ０ ｎ ｍ， 铜绿 微 囊藻 的细胞 密度 随 荧光 强度的 增 大而
增大， 呈正相 关 关 系， ｒ 一０ ． ９ ９ ９ ４ 。 关键词 ： 环 境质 量监 测与评 价 ； 蓝藻 ； 荧光 ； 生物 量 ； 检 测 中图分 类 号 ： Ｘ８ ３ ２ 文献标 志 码 ： Ａ ｄ ｏ ｉ ：１ ０ ． ７ ５ ３ ５ ／ ｈ ｂ ｇ ｙ ｋ ｊ ． ２ ０ １ ５ ｙ ｘ ０ ２ ０ ０ ８
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Ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏｆ ｃ ｙ ａ ｎｏ ｂａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｉ ｎ ｍｉ ｘ ｅ ｄ ａ ｌ ｇａ ｅ
ＣＵＩ Ｊ ｉ ａ ｎ ｓ ｈ ｅ ｎ ｇ ～．ＫＡＮＧ Ｈｏ ｎ ｇ ｌ ｉ ’ 。
（１ ．Ｓ ｃ ｈ ｏ ｏ ｌ ｏ ｆ Ｅ ｎ ｖ ｉ ｒ ｏ ｎ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｅｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ， Ｈｅ ｂ ｅ ｉ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｔｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｓ ｈ ｉ ｊ ｉ ａ ｚ ｈ ｕ ａ ｎ ｇ ， Ｈｅ ｂ ｅ ｉ ０ ５ ０ ０ ｌ ８ ，Ｃｈ ｉ ｎ ａ；２ ． Ｐ ｏ ｌ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｂｉ ｏ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ Ｉ ． ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｏ ｆ Ｈｅ ｂ ｅ ｉ Ｐｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ ，Ｓ ｈ ｉ ｊ ｉ ａ ｚ ｈ ｕ ａ ｎ ｇ，Ｈ ｅ ｂ ｅ ｉ ０ ５ ０ ０ １ ８ ，Ｃｈ ｉ ｎ ａ ）
以快 速有 效提 供原 水蓝 藻信 息 的预警 系统是 非 常重 要 的 ］ 。 目前 蓝藻 生 物 量 的 检测 方 法 很 多 ， 但 高
效液 相色谱 法 步骤 繁琐 、 预处 理步 骤复 杂 ； 流式 细胞
仪计 数法 仪器 昂 贵 、 不适 合 进 行 原 位测 量 ； 《 水 和 废
ｔ Ｏ ｆ ｌ ｕ ｏｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｃ ｅ ｉ ｎ ｔ ｅ ｎｓ ｉ ｔ ｙ ｏｆ ｍｉ ｃ ｒ ｏｃ ｙ ｓ ｔ ｉ ｓ ａ ｅ ｒ ｕ ｇｉ ｎ ｏｓ ａ ｐ ｈｙ ｃ ｏ ｃｙ ａ ｎ ｉ ｎ ｉ ｓ ｓ ｔ ｕｄ ｉ ｅ ｄ ．Ｔｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ｒ ｅ ｓ ｕｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏｗ ｔ ｈａ ｔ ，ｔ ｈｅ ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏｎ ｗａ ｖｅ —
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｗｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｈ ｅ ｌ ｐ ｏ ｆ ｆ ｌ ｕ ｏ ｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｒ ａ ，Ｍ ｉ ｃ ｒ ｏ ｃ ｙ ｓ ｔ ｉ ｓ ａ ｅ ｒ ｕ ｇ ｉ ｎ ｏ ｓ ａ ｉ ｎ ｖ ｉ ｖ ｏ，ｐ ｈ ｙ ｃ ｏ ｃ ｙ ａ ｎ ｉ ｎ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｎ ｇ ｓ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ —
ｐｈｙ ｌ ｌ ａ ｅｘ ｔ ｒ ａ ｃｔ ｉ ｎ ｇ ｓ ｏ ｌ ｕｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｒ ｅ ｉ ｎ ｖｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａｔ ｅ ｄ ｂｙ ｕｓ ｉ ｎ ｇ ｆ ］ ｕ ｏ ｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎｃ ｅ ｑ ｕｅ ｎ ｃ ｈｉ ｎ ｇ ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ，ａ ｎｄ ｔ ｈｅ ｉ ｎｆ ｌ ｕ ｅ ｎｃ ｅ ｏｆ ｄｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ａ ｌ ｇ ａ ｌ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｅ ｓ
ｔ ｏ ｓ ｙ ｎｔ ｈｅ ｔ ｉ ｃ ｓ ｉ ｇｎ ａ ｌ ｈａ ｖ ｅ ｓ ｉ ｇｎｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎｔ ｐ ｏｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ｃ ｏｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏｎ， ａ ｎ ｄ ｒ一 ０ ．９ ９９ ４．
Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ： ｅ ｎ ｖ ｉ ｒ ｏ ｎ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｌ ｑ ｕ ａ ｌ ｉ ｔ ｙ ｍｏ ｎ ｉ ｔ ｏ ｒ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｄ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ；ｃ ｙ ａ ｎ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ；ｆ ｌ ｕ ｏ ｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｃ ｅ ；ｈ ｉ ｏ ｍａ ｓ ｓ ；ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ
接 后放 人人 工气 候箱 中进 行 培养 。
Ｃｈ ｌ ａ
Ｅｘ ｃ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
１ ． ２ 叶绿 素 ａ和藻蓝 蛋 白提取 液 的获得 叶绿素 ａ的 提 取 参 考 《 水 和 废 水 监 测 分 析 方 法》 ［ １ ， 根据 Ｊ Ｅ Ｓ Ｐ Ｅ ＲＳ Ｅ Ｎ 公 式 计 算 叶 绿 素 ａ浓 度［ １ ］ ； 藻 蓝 蛋 白 采 取 反 复 冻 融 法ｌ １ 提取， 根 据
大 量工 业废 水 和 生 活污 水 排 入 自然 水体 中 ， 导
致 水体 富 营养化 现象 。近几 年 来 ， 蓝 藻 水 华 的 发 生 相 当频 繁 ， 中 国 常 的 水 华 藻ｕ ］ ： 蓝藻 占 ８ ｌ ， 绿
藻、 硅藻、 甲藻各 占 ６ ， 裸藻 占 １ 。蓝 藻 中的铜绿 微 囊藻 可 以分泌 产生 毒素 ， 对 人类 、 动植 物和 环境 的 危 害 日益 引起人 们 的关注 ［ ２ ］ 。
水监 测 分析方 法 》 中 的标 准 方 法 群 落 计 数 法 ， 主 观 性 大、 耗 时耗力 ， 而 且 只 能 在 实 验 室 中 完 成 。 鉴 于 这 些 方 法不 能实现 藻类 的快 速 、 原 位 测 量 而 失 去 了 检 测
传 统 的饮用 水处 理工 艺不 能完 全３月
河
北 工 业 科 技
Ｖｏ１ ．３ ２， ＮＯ ．２
Ｍａ ｒ ．２ ０１ ５
Ｈｅ ｂ ｅ ｉ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｉ ｎ ｄ ｕ ｓ ｔ ｒ ｉ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｔｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ
崔建升 ， 康红利． 混合藻中蓝藻的检测［ Ｊ ］ ． 河北工业科技， ２ （ ） ｌ ５ ， ３ ２ （ ２ ） ： １ ３ ４ — １ ３ ８ ．
Ｃ ＵＩ Ｊ ｉ ａ ｎ ｓ ｈ ｅ ｎ ｇ ，ＫＡＮＧ Ｈｏ ｎ ｇ ｌ ｉ ． Ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｅ ｙ ａ ｎ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｉ ｎ ｍｉ ｘ ｅ ｄ ａ ｌ ｇ ａ ｅ ［ Ｊ ］ ． Ｈｅ ｂ ｅ ｉ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｉ ｎ ｄ ｕ ｓ ｔ ｒ ｉ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｔｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， ２ ０ ｌ ５
的意义 和进行 水 华 预 警 的优 势 。因此 ， 需 要 建立 一
作 者 简介 ： 崔 建 升（ １ ９ ６ ６ ） ， 男， 河北沧州人 ， 教授， 博士， 主要 从 事 海 洋 环 境 监 测 方 面 的 研 究 。
Ｅ— ｍａ ｉ １ ： Ｃ ｔ ｌ ｉ １ ６ ３ ＠ｌ ６ ３ ． ｃ ｏ ｒ ｎ
３２（２）． １ ３４一 ｌ ３８．
第 ２ 期
崔建升 ， 等： 混 合 藻 中蓝 藻 的 检 测
ｌ ３ ５
种 可 以快 速 、 自动 、 原位 测量 蓝 藻 的方法 ［ ． ５ Ｊ 。
蓝 藻 的 主 导 光 合 色 素 为 叶 绿 素 ａ和 藻 蓝 蛋 白ｌ ＿ ７ 剐。藻蓝 蛋 白是 淡水 蓝藻 所特 有 的色 素 ， 有 很 强 的荧 光特性 并 且不 干扰 叶绿 素 的荧 光 。研究 发现 藻 蓝 蛋 白可 在 蓝 藻体 内从 其 他 藻 类 干 扰 中被 检 测 到 （ 见图 １ ） 。与 叶 绿 素 ａ的 活 体 荧 光 不 同 ， 蓝 藻 的 藻 蓝 蛋 白活体 荧 光与 细胞 个数 有典 型 的联 系＿ ９ ］ 。可 通 过 检 测藻 蓝蛋 白荧 光 强度快 速 检测 蓝藻 生物 量 。
Ｐ Ｃ Ｐ Ｃ Ｅｍｉ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ Ｃｈ ｌ ａ
藻（ 光 甲藻 ； １ １ ９培 养 基 ） 、 裸藻 （ 纤 细裸藻； ＨＵＴ 培 养基） ， 均来 自中 国科 学 院武 汉水 生生 物研 究所 淡水 藻种库 。 将 藻 种 置 于恒 温 培 养 箱 中扩 大 培 养 ， 培 养温 度 为 ２ ５℃ ， 光 照 强度 为 ２ ０ ０ ０ Ｌ ｕ ｘ ， 湿度调节至 ７ ５ ＲＨ， 光 暗周期 比为 １ ２ ｈ：１ ２ ｈ ， 培 养 基 在使 用 前 于 高压灭 菌锅 中灭 菌 ２ １ ｍｉ ｎ ， 然 后 在无 菌 操 作 下转 入 玻 璃 三角瓶 内 ， 按藻 种 与培养 基 的体积 比为 １： ５转