３１２ＣｈｉｎＪＨｅｍｏｒｈ．２００７；１７（２）ＲｈＤ阴性Ｄｕ和Ｄｅｌ检测及临床意义
翟菊萍，王雪明，邵惠江，奚为乎
（苏州大学附属第一医院检验科，江苏苏州２１５００６）
摘要：目的探讨初筛为ＲｈＤ阴性样本中Ｄ”及Ｄｅｌ的检测及其临床意义。
方法采用常规血清学方法初筛ＲｈＤ，用抗人球蛋白试验（ＡＨＧ）检测Ｄ”，应用三氯甲烷，三氯乙烯吸收放散法检测Ｄｅｌ。
结果在１００例ＲｈＤ阴性中经ＡＨＧ实验确认为Ｄｕ型者ｌ例（１％），吸收放散试验确认Ｄｅｌ型者８例（８％）。
结论Ｄ”、Ｄｅｌ型血清学筛选容易漏检为ＲｈＤ阴性，为了临床输血安全，经常规血清学检测ＲｈＤ阴性者，应当再用间接抗球蛋白试验及吸收放散实验检测是否为Ｄｕ及Ｄｅｌ。
关键词：Ｒｈ血型；Ｄ“；Ｄｅｌ；吸收放散试验
中图法分类号：Ｒ４５７．１２文献标识码：Ａ文章编号：１００９—８８１Ｘ（２００７）０２—３１２—０２
１９３９年，Ｌｅｖｉｎｅ和Ｓｔｅｔｓｏｎ发现了人类Ｒｈ血型系统，研究证明该系统是临床最重要的血型系统之一，也是人类２３个红细胞血型系统中最复杂最富有多态性的系统，该系统抗原抗体不匹配能引起溶血性输血反应、新生儿溶血病和自身免疫性溶血性贫血【Ｉ】，新生儿溶血病在临床上发病率仅次于由ＡＢＯ血型抗体引起的溶血性疾病，但由它引起的溶血病病情比由ＡＢＯ血型抗体引起的溶血病病情更加严重冈，Ｄ抗原在Ｒｈ系统中免疫原性最强，有文献报道，ＲｈＤ阴性个体输人１个单位（２００ｍＬ）ＲｈＤ阳性血液后，产生同种抗体的概率为５０％一７５％ｔ３棚，因此人们对Ｒｈ血型Ｄ抗原的研究倍加重视，现将我们的研究结果报道如下。
１材料与方法
１．１检测对象２００５年１０月～２００６年０６月苏大附一院门诊、住院病人及苏州市红十字血站献血员，均经常规血型血清学方法检测后初筛的ＲｈＤ阴性者共１００例。
１．２材料单克隆抗Ｄ血清（ＩｇＭ＋ＩｇＧ）购自德国ＢｉｏｔｅｓｔＡＧ公司。
“０”型ＲｈＤ阳性试剂红细胞：随机取已知ＲｈＤ阳性“０”型红细胞３份，洗涤３次后配成５％红细胞悬液。
离心机：购自瑞士ＤｉａＭｅｄ公司。
微柱凝胶反应卡购自瑞士ＤｉａＭｅｄ公司。
不完全抗Ｄ（ＩｇＧ）由上海市血液中心提供。
微柱凝胶血型卡：购自长春博迅公司。
１．３方法
１．３．１ＲｈＤ常规血型血清学初筛按照微柱凝胶血型卡操作说明书操作。
１．３．２Ｄ”检测将初筛ＲｈＤ阴性者的红细胞与单克隆抗Ｄ（ＩｇＭ＋ＩｇＧ）及不完全抗Ｄ血清（ＩｇＧ）做ＡＨＧ，设阴性及阳性对照。
抗Ｄ血清５０¨Ｌ及５％被检红细胞５０肛Ｌ加入微柱凝胶反应卡中，３７℃孵育３０ｍｉｎ，１０００ｒｐｍ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，观察结果。
与２种抗Ｄ全部凝集或部分凝集者判定为Ｄ”，并重复试验验证。
１．３．３Ｄｅｌ检测确证Ｒｈ阴性标本作三氯甲烷，三氯乙烯吸收放散试验【５】，将被检ＲｈＤ阴性压积红细胞与不完全抗Ｄ血清按１：１混匀，３７℃孵育Ｉｈ，然后洗涤６次，末次洗涤后移取部分上清液至另外标记试管中，其余弃尽上清液，加入与之等体积的生理盐水，再加入与之等量的三氯甲烷／三氯乙烯（１：１）混合液，加盖振摇１０ｓ，倒置ｌｍｉｎ使之混匀，开盖后３７℃水浴５ｍｉｎ；１０００ｒｐｍ／ｍｉｎ离心５ｒａｉｎ，取上层深红色放散液１００ＩＬＬ加５％“０”ＲｈＤ阳性红细胞５０斗Ｌ，３７℃孵育３０ｒａｉｎ，生理盐水洗涤１次，末次洗涤后弃尽上清液，加入少量稀释液，加人微柱凝胶反应卡中，１０００ｒｐｍ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，观察结果，阳性者经重复试验验证后确定为Ｄｅｌ型。
２结果
对初筛为Ｄ阴性的１００例标本以不完全抗Ｄ（ＩｇＧ）及单克隆抗Ｄ（ＩｇＭ＋ＩｇＧ）作ＡＨＧ，１例阳性（１％），为Ｄ“。
ＡＨＧ阴性标本９９例，经三氯甲烷／三氯乙烯吸收放散试验，检出Ｄｅｌ型８例（８％）。
３讨论
临床上凡带有Ｄ抗原者被称为ＲｈＤ阳性，不带
收稿Ｅｔ期：２００６—１１－０６作者简介：翟菊萍（１９７８一），女，江苏苏州人，医学学士，技师，主要从事临床输血工作。
中国血液流变学杂志．２００７；１７（２）３１３
Ｄ抗原者被称为ＲｈＤ阴性。
ＲｈＤ阴性在中国汉族人中占０．２％一０．５％。
ＲｈＤ阴性的个体绝大多数缺失ＲｈＤ基因，但某些ＲｈＤ阴性个体的产生是由于ＲｈＤ基因部分缺失或Ｄ基因突变后产生的，通常称为Ｄ“，可用ＡＨＧ检出。
另有一些ＲｈＤ阴性是由于Ｄ基因完整存在而Ｄ抗原数目减少，常用吸收放散试验来证明。
通常Ｄ阴性的红细胞上带有微弱的Ｄ抗原，称为Ｄ洗脱阳性（Ｄｅｌ）。
本组１００例初检为ＲｈＤ阴性的标本，经ＡＨＧ法检出Ｄ“１例０／ｌｏｏ），经吸收放散试验检出Ｄｅｌ８例（８／９９）。
该结果与国内相关报道Ｄｅｌ为１３．２％一３２．８％相比要低。
ＲｈＤ检测具有非常重要的临床意义，是由于ＲｈＤ阴性经免疫后产生抗Ｄ抗体的机率很高，为５０％一７５％【３一，且在预防迟发性溶血性输血反应及新生儿溶血病的发生起着重要作用。
当ＲｈＤ阴性，Ｄ“作为受血者时，经Ｄ阳性的红细胞免疫后有可能产生抗Ｄ抗体，而Ｄｅｌ的人是否会产生免疫，一般研究认为不会产生，原因为Ｄｅｌ则基本保留ＲｈＤ基因嘲。
所以Ｄ”作为受血者时应视作Ｄ阴性。
当Ｄ“，Ｄｅｌ作为供血者时，其与Ｄ抗原～样具有免疫原性，应视作Ｄ阳性。
所以，供者血液做Ｄ阴性确证试验是必须的。
一直以来，ＡＨＧ试验是ＲｈＤ阴性确认的最终手剧６１。
然而研究说明ＡＨＧ试验鉴定的ＲｈＤ阴性中，改用更敏感的三氯甲烷，三氯乙烯吸收放散试验仍有相当一部分个体可检出Ｄｅｌ。
本研究中我们将深红色放散液与“０”型ＲｈＤ阳性红细胞孵育后洗涤一
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参考文献
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【２】刘朋来，杜菊仙，沈新华．ＥＬＩＳＡ检测抗一ＨＣＶ灰带区血样的次，再加入微柱凝胶反应卡中，操作方便，反应灵敏，结果易判。
另外国内一些实验室已建立ＰＣＲ方法检测Ｄｅｌ基因型【．７１，操作简单快捷，但是ＰＣＲ方法可能会出现假阳性结果，亦可能因基因的突变或变异，造成错误的结果，同时还受一定的仪器设备条件的限制，所以临床还不能普遍推广使用。
目前，全国大部分血站提供给临床的ＲｈＤ阴性血液，由于没有检测Ｄｅｌ或用ＰＣＲ方法检测ＲｈＤ基因及Ｄｅｌ基因型，给ＲｈＤ阴性患者的输血带来一定的隐患。
（感谢苏州市红十字血站提供部分标本）
参考文献
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