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活体染色实验


实验目的
1、练习并掌握动物组织活体染色方法。 2、学习大鼠肠系膜铺片制作方法。 3、学习大鼠皮下结缔组织铺片制作方法。 4、了解大鼠肝脏石蜡切片制片方法,观察Kupffer 细胞。
实验原理
要显示巨噬细胞多采用活体染色法,即将一种对 动物无毒害或毒性很小的染料,用注射器注入动物体 的腹膜腔或血管内,体内有吞噬能力的细胞会将注入 的活体染料吞噬入细胞内。然后将动物杀死取材,经 固定、浸洗、复染、脱水、透明、封固等手续制成玻 片标本。
再用蒸馏水浸洗片刻,即可进行染色。也可直接进 入70%酒精中保存。 5、染色
固定好的铺片进行常规HE染色(详细过程见石 蜡切片制作介绍)。
注意:盐酸酒精分色要适度,过量会导致巨噬 细胞脱色。
活体染色法显示巨噬细胞
定义:活体染色(vital staining)一 般是指用无毒或毒性很小的染料,在不影响 细胞的正常生命活动的前提下而使活细胞 的某些结构着色的一种实验方法。
最早进行活体染色的是Paul Ehrlich (1885)他把刚切下的新鲜组织浸泡在亚甲 基蓝(美蓝)溶液中,再用显微镜来观察尚处 在生活状态下的活细胞结构。
活体染色一般选用的燃料有台盼蓝、中性红、锂 洋红、墨汁等。
实验材料与器材
实验动物:成年大白鼠
实验试剂与器材:1%台盼蓝染液,乙醚,福尔马林,
酒精(梯度),harris苏木精染液、曙红染液,二甲 苯,中性树胶;手术器械一套, 5ml注射器,载玻 片,盖玻片,卧式染缸,单面刀片。
实验步骤
1、活体注射 大白鼠麻醉、称重,按8ml每千克体重动物,注
射1%的台盼蓝溶液。每天注射一次,注射、取材 动物断头处死,取皮下结缔组织、肠系膜、肝脏或
大网膜为材料。取小块结缔组织或肠系膜,置于载玻片 上,用解剖针尽量将其铺平,干燥后浸入10%福尔马林 中固定。 3、固定
用10%福尔马林固定12—24h。
4、浸洗 用70%酒精浸洗数小时,中间更换数次新液,
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