《动物及其制品中细菌耐药性的测定—纸片扩散法》
编制说明
一、任务来源
本标准是根据国家质检总局下达的2011年度行业标准修订计划项目，项目编号为：2011B522r。

由上海出入境检验检疫局进行修订。

二、修订意义
抗菌药物是目前人类和兽医临床使用最广泛的抗感染药物，在治疗与控制人畜传染病方面起着重要的作用。

在畜禽养殖过程中也常常使用抗生素来提高动物的抗病能力，促进生长。

但随着抗生素的不断应用，细菌对抗生素的耐药性逐年上升，耐药菌的产生日趋增多，传播日渐迅速，其严重性已不容忽视。

动物源性细菌的耐药性不但和畜牧业生产有着十分密切的联系，更直接关系人类的健康。

控制动物源性细菌的耐药性的产生及传播是解决人类日趋严重的耐药性问题中的重要环节，也是目前国际社会的共识。

现行的SN/T 1944-2007《动物及其制品中细菌耐药性的测定——纸片扩散法》于2007-08-06发布，2008-03-01实施，由上海出入境检验检疫局负责起草，标准主要参考了美国临床和实验室标准协会（Clinicaland Laboratory Standards Institute，CLSI）的《抗菌药物敏感性试验执行标准第十六版补充说明》M100-S16（2006）和《抗菌药物敏感性试验纸片扩散法操作标准》M02-A9（2006）的相关内容。

为符合和适应抗菌药物临床应用和研究进展，CLSI对解释标准M100每年进行更新，操作标准M02每3年进行更新。

到2013年为止，M100已更新至第23版（M100-S23，2013），M02 更新至第11版（M02-A11，2012）。

而CLSI针对兽用药临床的《动物来源细菌的抗菌药物敏感性试验扩散法和稀释法执行标准》现更新至第3版（M31-A3，2008）。

随着近年来抗菌药物耐药性的发展，新耐药机制的出现和用药方式的改变，以及法律法规层面对抗生素使用的新规定，从2007年至今，CLSI系列标准的技术内容较原先行业标准参考的内容已有不少的改变。

为适应出入境检验检疫工作与时俱进的需要，按照国家认监委关于《出入境检验检疫行业标准复审修订计划项目》的批复意见，参考CLSI 标准最新版本内容，按GB/T1.1、GB/T1.2要求，对该标准进行文本格式及内容的修订。

三、修订依据
1. GB/T 1.1-2009 标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则
2. CLSI M100-S23《抗菌药物敏感性试验执行标准-第二十三版及补充说明》
3. CLSI M02-A11《抗菌药物敏感性试验纸片扩散法操作标准-第十一版》
4. CLSI M31-A3《抗菌药物敏感性试验纸片扩散法操作标准-第三版》
5.SN/T 1944-2007《动物及其制品中细菌耐药性的测定——纸片扩散法》
四、修订内容
本标准针对CLSI M100-S23和CLSI M02-A11与原CLSI M100-S16和CLSI M02-A9之间的更新点进行了修订，增加了CLSI M31-A2的规定要求和技术内容，并按照GB/T 1.1-2009规范了文本格式。

本标准对SN/T 1944-2007主要修订如下：
——按照GB/T 1.1-2009 标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写，规范了文本格式。

——检测方法部分按美国临床和实验室标准协会最新标准CLSIM100-S23（2013）《抗菌药物敏感性试验执行标准》和CLSI M02-A11（2012）《抗菌药物敏感性试验纸片扩散法操作标准》进行了修订。

具体内容见表1。

——附录部分按美国临床和实验室标准协会最新标准CLSIM100-S23（2013）《抗菌药物敏感性试验执行标准》和CLSI M31-A3（2008）《动物源性细菌抗菌药物敏感性试验执行标准》进行了修订。

考虑到标准的适用范围为动物源性细菌，对原附录中与动物源性细菌耐药性无关的部分进行删减，动物源性细菌耐药性特有的部分及特定耐药机制的测定进行了增补。

具体内容见表1。

表1.标准内容区别
五、验证测试
1、室内验证
以标准菌株及38株禽源性大肠杆菌对6种抗生药物的耐药性检测比较扩散法和稀释法之间的符合程度。

结果见表2和表3。

表2：标准菌株对6种抗菌药物的耐药测定：
表3：38株禽源性大肠杆菌对3种抗菌药物的耐药性测定：
纸片扩散法与药物敏感性试验参考方法稀释法之间有很好的一致性，耐药率的符合率达到100%。

氨苄西林和环丙沙星各有一株大肠杆菌的结果为“中介（I ）”，而用微量稀释法测定结果均为“敏感（S ）”，符合CLSI 关于“中介”的解释标准。

2、室间验证
江苏出入境检验检疫局技术中心、浙江出入境检验检疫局技术中心、国家食品质量监督检验中心（上海）和上海市食品药品检验所应邀对本修订标准的部分技术内容进行了验证测试。

内容包括标准质控菌株的纸片扩散法和微量稀释法比对，结果汇总见表4；随机编号的3株大肠杆菌未知菌株和3株金黄色葡萄球菌未知菌株同时采用纸片扩散法和微量稀释法比对检测，其中有1株耐甲氧西林/苯唑西林的金黄色葡萄球菌（MRSA ）和
1株产超广谱β内酰胺酶的大肠杆菌（ESBL ），结果汇总见表5。

表4标准菌株对抗菌药物的耐药测定
表5未知菌的特定耐药机制的测定
3、验证结论汇总
纸片扩散法测定细菌耐药性操作简便，易于判读，与参考方法稀释法的符合性好，准确性高，可准确检测特定耐药机制，适用于动物源性产品中分离的细菌的耐药性及特定耐药机制的检测及监测。