中南大学食品分析课程论文题目：食品中叶酸的测定方法学生姓名：毛慧悦所在学院：化学化工学院专业班级：应用化学1105班学生学号：1505110706指导老师: 张泰铭目录1叶酸 (1)1.1叶酸的化学结构 (1)1.2叶酸的理化性质 (1)1.3叶酸的作用效果 (2)2 果蔬中叶酸含量的测定方法 (2)2.1化学发光测定法 (2)2.2离子捕获法 (3)2.3F ENTON试剂氧化-荧光分析法 (3)2.4催化氧化荧光法 (3)2.5衍生荧光法 (4)2.6间接原子吸收光谱法 (4)3 保健品中叶酸的测定方法 (5)3.1铽一环丙沙星稀土敏化荧光猝灭法 (5)3.2表面等离子共振技术（SPR） (5)3.3高效液相色谱法（HPLC）法 (5)3.4高分离度快速液相色谱法（RRLC） (6)3.5氨基硅油修饰碳糊电极阳极伏安法 (6)3.6发光免疫法 (7)3.7PEI修饰的量子点作为叶酸荧光探针 (7)4结论与展望 (7)4.1结论 (7)4.2展望 (8)食品中叶酸的测定方法毛慧悦（中南大学，湖南长沙 410012）摘要：叶酸，又称为维生素B9，是维生素B9的水溶形式。

叶酸是一种重要的一碳载体，在核苷酸合成等重要生理代谢功能方面有非常重要的作用。

因此叶酸在细胞分裂和生长过程（如婴儿发育、怀孕）中有着重要的作用。

叶酸的检测已成为食品研究中的热点，本文从叶酸的结构和检测几个方面展开研究，并重点阐述了果蔬和保健品中叶酸的几种测定方法。

关键词：叶酸；测定方法；果蔬；保健品Testing of folic acid in foodsMAO Hui-yue（Central South University，Hunan Changsha 410012，China）Abstract:Folic acid, also known as vitamin B9 or B c, a water-soluble form of vitamin B9. Folic acid is an important one-carbon carrier in nucleotide synthesis, metabolism of many important physiological functions of homocysteine re methylation plays an important role. Therefore, there is a particularly important role of folic acid in the rapid cell division and growth (such as infant development, pregnancy) in. Folic acid food testing has become a hot research paper from the structure, preparation of folic acid, extraction and detection aspects of a study, and focuses on the determination of several fruits and vegetables and health supplements of folic acid.Key words：folic acid；testing；vegetables and foods；health products.1叶酸1.1 叶酸的化学结构叶酸(Folic acid)，是维生素B9的水溶形式，也被称为蝶酞谷氨酸。

叶酸在人体中的含量虽然不多，但是却是人类生理活动必不可少的。

具有促进泌乳、美肤黑发和防治口腔溃疡的功效，天然叶酸存在于绿叶果蔬和动物肉蛋奶、肝脏中[1]。

叶酸主要是作为甲基供体参与甲基化反应与去氧核糖核酸的合成，它是不能被直接利用的，是要通过连续的活化反应后才能发挥其生理功能，缺乏叶酸将会引起人体异常[2]。

叶酸是由蝶啶、对氨基苯甲酸和谷氨酸连结而成，即由a-氨基一4-羟基蝶啶与对氨基苯甲酸相连，然后以-NH-CO-键与谷氨酸连接而成[1]。

结构式如图一。

图一叶酸的结构式1.2 叶酸的理化性质叶酸是一种晶体，对热不稳定，将其放在两百度左右的环境中会被分解。

叶酸溶于碱溶剂，但对于许多有机溶液而言均不溶。

叶酸在碱性环境下比在溶液呈酸性的环境下要稳定的多。

溶液的酸度低于5左右时非常不稳定，叶酸在此环境下物质结构会被分解。

叶酸对光不稳定，见光易被分解，尤其容易被紫外线所破坏，常温下保存也会引起损失，因此叶酸要处在密封、避光和低温的环境中保存[3]。

1.3 叶酸的作用效果从许多研究报道看来，叶酸最主要的作用是体现在孕妇与胎儿的健康方面，贫血是孕妇和胎儿很容易发生的病症，研究表明，这种情况下的贫血一般来说是缺乏叶酸所致，病因通常被认为是在生成叶酸辅酶的过程中某种未知物质的代谢不足。

正在发育的胎儿对于母体的营养物质的要求非常高，其中一点是要有大量的叶酸在母体中储存。

但许多情况下孕妇在怀孕初期，由于孕吐导致进食过少甚至厌食就很容易引起孕妇体内缺乏叶酸的储存，这对胎儿和孕妇的健康十分不利。

叶酸在孕期存储不足就会导致在孕妇临产或产后早期，叶酸非常容易被耗尽的情况，叶酸储存耗尽极易引起妊娠毒血症或巨红细胞性贫血等病症。

另外，叶酸缺乏对于新生儿而言是一个较为严重的问题，轻则肠胃不适，重则发育迟缓。

新生儿的神经系统发育等，都与叶酸的缺乏有着不可避免的关系。

有实验表明，叶酸缺乏也会导致胃肠功能障碍、神经系统疾病甚至癌症的产生。

叶酸的缺乏会导致许多疾病产生，但体内叶酸含量的过量也会不利于健康。

如果摄入量过高会慢慢地改变人类的基因组成，导致后代对于某些致命性疾病的抵抗力减弱[4]。

2 果蔬中叶酸含量的测定方法2.1 化学发光测定法化学发光法种类较多，有液相发光和气相发光，后来技术改进后又发明了生物发光。

科学家发现化学发光也可与许多先进技术联用，如与分子印迹技术的联用，与毛细管电泳法和低压离子色谱的联用等[5]。

化学发光的原理比较简单，是指在化学反应中，反应物或其他可接受能量的物质，吸收反应过程中产生的化学能，被激发而处于激发态，回到基态时产生一定频率的光波辐射，这就是化学发光。

化学发光法相较于其他测定叶酸含量的方法而言灵敏度高、重现性好并且操作简单等显著优点。

这种方法比较适用于对含叶酸浓度较低的果蔬的检测，因为其灵敏度高，检测的结构也较其他方法更为准确。

2.2 离子捕获法离子捕获法的原理是要将样品中的叶酸变成游离态，可以在样品中加入脂肪胺聚氧乙烯醚，之后叶酸与结合蛋白分离，叶酸与亲核基团结合，最后与改性涤纶纤维结合，最后定量分析样品中叶酸的含量，即质量分数[4]。

从离子捕获法的原理来看，该法的绝对优势在于其既可以定性，还可以定量，对于尚无标准样品的未知叶酸含量的果蔬而言，是非常适合的方法。

2.3 Fenton试剂氧化-荧光分析法Fenton试剂是化学家Fenton首次发现的，所以被命名为芬顿试剂。

这种试剂是一种混合试剂，包含双氧水与亚铁离子，氧化能力很强。

许多有机化合物都能被氧化，氧化效果明显。

氧化机理比较复杂，首先是过氧化氢与亚铁离子反应生成游离的·OH和氢氧根离子，与有机物反应而消耗掉了·OH。

通过填充未饱和的C - C键，羟基无选择性地与有机物迅速反应。

同时，研究表明Fenton试剂具有一定的絮凝沉淀功能。

Fenton试剂是一种极强的氧化剂，可用于叶酸的测定，叶酸能被Fenton试剂反应产生的自由基可将氧化，叶酸被氧化成蝶啶-6-羧酸荧光强度大大增强，更易于检测[6]。

2.4 催化氧化荧光法催化氧化荧光法中要求在PH为5的酸性介质（多为醋酸-醋酸钠缓冲对）中和80摄氏度左右的水浴加热的环境中进行，钴离子直接催化KIO氧化叶酸使其生成氧化产物蝶啶-6-羧酸，使其发出荧光，在实验过程中了解到反应需要较长的时间，但是当体系中加入钴离子之后，反应的速率曲线明确表明反应速度显著加快，而且荧光强度大大增大，更易被检测。

从反应的光谱形状来看，由于形状并没有改变，所以认定钴离子在反应体系中只起到了催化作用，并没有影响到物质的化学结构[7]。

2.5 衍生荧光法前文有介绍叶酸的结构，可以知道叶酸的共扼性不强，荧光较弱。

溶液呈酸性条件和光照条件下叶酸容易被破坏，极不稳定。

衍生荧光法需要破坏叶酸的肽胺键，使叶酸生成荧光强度更大的蝶啶-6-羧酸。

前文亦有介绍在酸性条件下叶酸不稳定。

所以我们在PH低于5的情况下氧化叶酸，并用紫外光线照射样品。

实验发现叶酸的荧光很弱，线性范围非常窄，而氧化后紫外光照衍生荧光法的方法有很高的灵敏度。

经过酸性介质和强氧化剂氧化剂紫外光照射处理后产生的氧化产物荧光强度增强，使样品灵敏度提高了两到三个数量级[8]。

2.6 间接原子吸收光谱法原子吸收光谱法的原理是利用气态原子吸收特定波长的光辐射，使原子中外层的电子从基态跃迁到激发态的现象的一种检测方法[9]。

不同电子能级跃迁吸收的光的频率不同，释放能量产生的光波长也就会不同，根据释放出的光的频率和波长的测定可以对元素定性，也可以通过测定释放的光波的强度测定样品中待测组分的含量。

适用对样品的痕量组分的分析。

查资料已知叶酸在碱度环境下比较稳定，间接原子吸收光谱法是在一定的碱度下，使叶酸与镁离子反应完全沉淀，然后测定清液含量。

首先将果蔬样品中的叶酸溶于Na2CO3溶液中，经过超声振荡后离心分离提取，调节溶液为一定的碱度，并加入一百毫克每升的镁离子溶液，使其充分反应后沉淀，然后吸取离心后的上层清液里的镁离子浓度，间接计算得到叶酸的含量。

间接原子吸收光谱法方过程简单、测定快速、干扰小、灵敏度高而且精密度好，非常适用于测定果蔬中的叶酸含量的分析。

3 保健品中叶酸的测定方法3.1铽一环丙沙星稀土敏化荧光猝灭法就目前所知的叶酸的检测方法有许多都存在这各自的缺陷，比如紫外光谱法测定叶酸的干扰多，某些荧光法的重现性差。

将叶酸分子作为整体进行荧光分析的方法，还没有产生，基本上所有的方法都破坏了叶酸分子的结构。

铽一环丙沙星稀土敏化荧光猝灭法利用铽与环丙沙星反应的产物能产生“稀土敏化荧光”铽的特征峰，之后加入叶酸可碎灭铽与环丙沙星反应体系在某波长的特征荧光。

在这种原理上建立的荧光法保全了叶酸分子结构的完整性[10]。

3.2 表面等离子共振技术（SPR）表面等离子体共振技术试最近快速发展的新型检测技术，这种原理制造的生物传感器可以实时检测分子之间的作用，而且测量结果十分准确，不用对样品分子，即叶酸进行标记。

表面等离子共振技术，是一种快速定量测定保健品中叶酸的方法。