DC-CIK联合化疗治疗晚期胃癌的近期疗效观察【摘要】目的探讨树突状细胞（dendritic cell，DC）共培养细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer,CIK）联合化疗治疗晚期胃癌患者的近期疗效。
方法选取28例确诊的晚期胃癌患者采用DC-CIK联合化疗为联合治疗组，选取临床资料相近的同期进行单纯化疗的28例的晚期胃癌患者为对照组，观察两组患者治疗前后外周血中T细胞亚群,细胞因子及卡氏评分（Karnofsky KPS）的变化，临床疗效，并记录其不良反应。
结果联合治疗组患者治疗后CD3+,CD4+,CD56+和CD4+/CD8+的比例无明显变化（P＞0.05），对照组CD3+,CD4+和CD4+/CD8+的比例治疗后明显下降（P<0.05）；联合治疗组的细胞因子IL-12和IFN-γ的水平治疗后有所上升（P<0.05），治疗组IL-2, IL-12和TNF-α的水平治疗后有所下降（P<0.05）。
联合治疗组的疾病控制率为78.6%，与对照组的53.6%差别有统计学意义（P<0.05），KPS评分总提高率为82.14%，与对照组的57.14%差别有统计学意义（P<0.05），结论DC-CIK联合化疗与对照组比能提高患者的免疫功能及生活质量，DC-CIK免疫治疗联合化疗可望成为胃癌有效的过继免疫治疗方法。
【关键词】树突状细胞;细胞因子诱导的杀伤细胞;胃癌;过继免疫治疗Short-term curative efficacy of DC-CIK cell-therapy combined with chemotherapy on patients with advanced gastric cancer【Abstract】Objective To investigate clinical effects of dendritic cells(DC) co-cultured with cytokine induced killer cells(CIK) combined with chemotherapy on patients with advanced gastric cancer.Methods twenty-eight patients with advanced gastric cancer were treated with DC-CIK combined with chemotherapy were taken as the combined treatment group,another twenty-eight patients who were treated with chemotherapy alone during the same period were taken as control. T lymphocyte subtypes ，intra-cellular cytokines in peripheral blood of the patients and Performance Status (KPS) were compared between the two groups.The clinical effects were analysed. The safety were observed. Results The ratios of CD3+,CD4+,CD56+andCD4+/CD8+ were not change obviously in combined treatment group and decreased in control group after treatment, which showed significant statistical difference (P<0.05) .The IL-12 and IFN-γwere increased after treatment in combined treatment group, (P<0.05). The IL-2, IL-12 and TNF-αwere decreased in control group after treatment, (P<0.05). The disease control rate (DCR) of combined therapy group and control group were 78.6%and 53.6%respectively showing significant difference (P<0.05).The effective rate of KPS were 82.14%and 57.14%respectively showing significant difference (P<0.05). Conclusion:DC-CIK cells combined with chemotherapy can improve immune functions and elevate life quality of the patients. DC-CIK cells combined with chemotherapy is likely to be an effective adoptive immunotherapy for gastric cancer【key words】dendritic cells; cytokine induced killer cells; gastric cancer我国胃癌病人诊断时85%处于晚期[1]，手术、化疗、放疗等传统治疗方法取得一定成效，60%的病人术后会出现局部复发和转移[2]，其5 年生存率仍仅为25%[3]，新的治疗手段显得尤为重要。
免疫治疗既能直接杀死肿瘤细胞又能增加机体免疫功能[4]，无明显毒副反应，已成为肿瘤治疗的第4个主要治疗方法[5]。
DC和CIK共培养（DC-CIK）可促进CIK的增殖和成熟，增强CIK的细胞毒活性，CIK也能促进DC的成熟，并且使其分泌大量IL-2[6],所获得的DC-CIK细胞由于细胞毒活性强及安全可靠成为该领域极具发展前景的免疫细胞。
我们自2009年2月至2013年2月，通过将DC与CIK共培养后联合化疗，单纯化疗分别治疗晚期胃癌患者，对比观察其近期疗效、不良反应、对免疫功能、生活质量的影响。
1 材料与方法1.1 一般资料选取2009年2月至2013年2月，病理学方法确诊为晚期胃癌并给予DC-CIK联合化疗的患者28例为联合治疗组，选择同期临床资料相近的28例接受单纯化疗的晚期胃癌患者为对照组，详见表1。
入选标准：重要脏器功能正常，无自身免疫疾病，卡氏评分>60分，预计生存期超过6个月，治疗前心、肝、肾功能大致正常。
患者或家属签署知情同意书，本研究经医院伦理委员会批准。
表1 两组病人的临床资料情况Table 1 Distribution of demographic and clinical characteristics in two groups临床特征例数分组ｘ2P联合治疗组（%）对照组（%）性别男43 21(75.0) 22(78.6) 0.1 ＞0.05 女13 7(25.0) 6(21.4)中位年龄（岁）59（36~79）62（41~77）58（36~79）胃癌部位贲门部21 10（35.7）11（39.2）胃体部23 13（46.4）10（35.7）0.772 ＞0.05 胃窦部12 5（17.9）7（25.0）病理类型低分化腺13 7（25.0）6（21.4）中分化腺36 17 （60.7）19（67.9）0.331 ＞0.05 粘液腺7 4（14.3）3（10.7）术后复发转移/晚期（例）30/26 17/11 13/15转移部位肝9 4（14.3）5（17.9）腹腔7 4 （14.3）3（10.7）肺7 3 （10.7）4（14.3）0.486 ＞0.05 盆腔 5 2 （7.1）3（10.7）骨7 3（10.7）4（14.3）治疗方式首治/单纯手术17 8 9一线化疗18 11 7 1.56 ＞0.05 二线或以上化疗21 9 12放疗 5 2 3治疗前KPS评分56 74.64±8.81 74.28±8.36 ＞0.051.2 DC-CIK 细胞培养1.2.1 DC细胞的体外培养和扩增DC的体外培养化疗前2天采集患者自体外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell, PBMC），用生理盐水洗涤4次，然后使用RPMI 1640培养基（加拿大维森特公司）调节细胞密度至2.5×106～3×106个/ml，将细胞接种于6孔培养板，置37℃、5%CO2培养箱孵育90 min后吸取未贴壁细胞（peripheral blood lymphocyte，PBL），于孔中加入DC诱导培养液（含5%自体血浆、100ng/ml rhGM-CSF、50ng/ml rhIL-4），置37℃、5%CO2培养箱中诱导，第3天进行1/3换液，第5天收获未成熟DC（imDC），加入终浓度为20ng/ml IL-1β、5 µg/ml PGE-2、20 ng/ml TNF-α，诱导DC成熟，第7天收获成熟DC（mDC）。
1.2.2 CIK的体外培养PBMC贴壁培养后收获PBL，重悬于5％自体血浆RPMI 1640培养液中，调整细胞密度至2.5×106/ml，铺入预先包被有anti-CD3 mAb的75cm2培养瓶中，添加IFN-γ（1000 U/ml），置于37℃、5% CO2培养箱中孵育，第二天添加IL-1α（终浓度10 ng/ml）、IL-2（终浓度250 U/ml），继续培养；第3天用含5%自体血浆RPMI 1640培养液进行添液，此后实时观察细胞状态适当添液或扩瓶1.2.3 DC与CIK共培养CIK培养至第7天，将细胞合并至一瓶，将收获的mDC加入CIK细胞悬液中，同时补充自体血浆浓度至10%，添加IL-2至终浓度250 U/ml，轻轻吹打混匀，按照每瓶60ml 平均分配到75cm2培养瓶中，置于37℃、5% CO2培养箱中继续培养，共培养2-3天后至细胞达到回输数量可启动回输。
1.2.4 DC-CIK质量控制每次治疗前24 h和治疗前2h，对DC-CIK细胞取样，按照《中华人民共和国药典》2010版方法进行细胞活率、内毒素和革兰氏染色等检测，细胞活率大于90%，待检测结果均为阴性后收集9-13d诱导扩增后获得的DC-CIK细胞，0.9%氯化钠溶液洗涤3次后配成100ml 液体静脉回输，每天输1次，回输（5.0±0.5）×108细胞/次，连续5次为一个疗程。