自来水冷却 过滤到25ml容量瓶， 去离子水冲洗残渣，定容
容量瓶、漏斗 洗刷一遍。
3、样品液的测定——比色
4支试管
空白试管 加0.2ml蒸馏水
试管洗刷一遍,防止不 净致重复间误差较大。
样品试管3支 各加0.2ml样品液
溶液加到试管底 部，以免影响结 果重复性。
加5%水杨酸-硫酸0.5ml
(在磁盘中加! 移液管立即冲洗)
NO2 NH4
-
aa
二、测定原理：水杨酸法
在浓酸条件下，NO3―与水杨酸反应， 生成硝基水杨酸。
硝基水杨酸在碱性条件下（ pH>12 ）呈黄色， 最大吸收峰的波长为 410nm ，在一定范围内，其颜 色的深浅与含量成正比，可直接比色测定。
四、操作步骤程序：
1．标准曲线的制作（学生不做）
C(μg/ml)=110.99D410+6.30
4、结果计算（课后计算）： C/2 × V NO3-﹣N含量(μg/g) = W
式中：C－标准方程计算得NO3-－N浓度（μg/ml） V—提取样品液总量(体积，ml) W—样品鲜重(g)
C/2－显色时取样0.2ml，标准曲线0.1ml
结果记录：记载表老师签字 用品洗刷干净，检查摆放整齐、齐全 报告老师，经检查同意可离去
室温放置20min
使用强酸、强碱注意安 全，如意外发生外溅， 立即用水冲洗和擦洗。 两组合作测定须用同一 台分光光度计。
加 9.3ml 8% NaOH 冷却比色(410nm)
注意事项：
①分光光度计：比色杯用水冲洗，擦镜纸擦 净；比色杯倒液不超2/3；用完后及时洗净! ②废液（因含浓酸、碱）倒在专门收集容器 内，切勿倒入水池内!! ③测定结束后，将试管彻底洗刷干净（因含 强碱），倒置在试管架上!
注：2个小组合作，结果共用，一起分析
10ml需要很准确？
一、测定意义：
1、作为施肥指标：
植物体内硝态氮含量可以反映土壤氮素 供应情况。包括：硝态氮、亚硝态氮。
2、鉴定蔬菜及其加工品质：
蔬菜类作物特别是叶菜和根菜中常含 有大量硝酸盐，在烹调和腌制过程中可转化 为亚硝酸盐而危害健康。因此，硝酸盐含量 又成为蔬菜及其加工品的重要品质指标。
人体摄入的硝态氮81.2％来自蔬菜，当人摄取硝酸 盐量较大时，体内的 NO3 － 还原成 NO2 － 进入血液，将血 液中的血红素变成高铁蛋白，引起肌体中毒。 NO2 － 还 可间接与次级胺结合形成强制癌物质－亚硝胺。
咸菜的淹制初期咸菜内会大量积累硝酸盐，硝酸 盐含量升高数倍或数十倍，当咸菜淹制成熟后硝酸盐 含量减少（很低），所以，咸菜没有淹制完成之前， 不要食用。
(S22P型分光光度计) 2．样品中硝酸盐的提取 3．样品液的测定——比色 4. 结果计算
2、样品中硝酸盐的提取
材料剪碎、混匀 精确称取 1.0g，3份重复
2个小组合作，结果共用分 析；同几株材料； 一组叶片、另一组叶柄。
放入具塞试管，加去离子水10ml 塞子封口，橡皮筋捆扎在一起 沸水浴中提取30min
青菜放置时间延长一天，体内的硝酸盐含量会不 断增加，购买蔬菜后及时食用，不要放置时间过长， 减少硝酸盐的积累。
3、植物组织中硝态氮代谢过程？
硝态氮（高度氧化状态）－不能直接合 成其它有机化合物，还原后才能利用。
如何还原的？
NO3
-
细胞质，硝酸还原酶 NADH提供氢体 叶绿体，亚硝酸还原酶 铁氧还蛋白Fd提供电子
值日生负责注意: 清理分光光度计、比色皿、台面清理。
下一个实验：地点：B131#
叶绿体色素的提取、分离和理化性质 (实验16)
植物体内硝态氮含量的测定
1 教师提前烧水，讲解完内容后打开分光光度计开关
2 学生进教室先做硝态氮提取，后讲解实验内容。
三、实验材料
小白菜：绿叶片、叶柄
两个小组合作： 一个小组。
同几株小白菜（一组叶片、另一组叶柄）
材料剪碎、混匀 精确称取 1.0g，3份重复 放入具塞试管，加去离子水至10ml 塞子封口，橡皮筋捆扎在一起 沸水浴中提取30min (最好2次，本实验提取1次)