实验十一、 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察 『目的要求』
1、熟悉并理解细胞吞噬活动的生理过程 2、掌握诱导产生小鼠腹腔巨噬细胞的方法
『实验用品』
光学显微镜、2ml注射器、载玻片、盖玻片、解剖器械、1％ 鸡红细胞液、小白鼠、6％淀粉肉汤(含台盼蓝)、生理盐水 试剂的配制： 6％淀粉肉汤：称取牛肉膏0.3g、蛋白胨1.0g、氯化钠O.5g和 台盼蓝(trypan blue)0.3g分别加入到100ml蒸馏水中溶解， 再加入可溶性淀粉6g，混匀后煮沸灭菌，置4℃保存，使用时 温浴溶解。
单核巨噬细胞
『实验内容和方法』 (一)标本制备 1、在实验前一天，每只小鼠腹腔注射6％淀粉肉汤(含4％ 的台盼蓝)lml。 2、实验时每组取一只经上述处理的小鼠，腹腔注射1％的 鸡红细胞悬液lml。然后轻揉小鼠腹部，使鸡红细胞分 散。(腹腔注射时不要刺伤内脏) 3、20分钟后向腹腔注射0.5 ml生理盐水，轻揉小鼠腹部， 使其腹腔液稀释。3分钟后用用颈椎脱臼法处死小鼠。 4、将小鼠置于解剖盘中或卫生纸上，剪开腹腔，把内脏 推向一侧，用吸管或不装针头的注射器吸取腹腔液。 5、每人取一干净载玻片，滴一滴腹腔液，盖上盖玻片， 标本便制备好了。 6、实验绘图。
『实验原理』
高等动物体内存在着具有防疫功能的吞噬细胞 系统，它由粒细胞和单核细胞等白细胞构成，是 机体免疫系统的重要组成部分。巨噬细胞是体内 的一种重要的免疫细胞，具有非特异性吞噬功能， 当机体受到细菌等病原体及其它异物侵入时，巨 噬细胞将向病原体或异物游走，当接触异物时， 伸出伪足将其包围并进行内吞作用，将病原体或 异物吞入细胞，形成吞噬泡，进而初级溶酶体与 吞噬泡发生融合，将异物消化分解掉。本实验将 观察到小鼠巨噬细胞对进入其体内的鸡血红细胞 进行吞噬的情况。
(二)观察
巨噬细胞体积较大，呈圆形或不规则形，表面 具有多个突起 ( 伪足 ) ，胞质中含有数量不等、大 小不一的蓝色颗粒，它们是细胞吞噬含台盼蓝的 淀粉肉汤后形成的吞噬体； 鸡红细胞呈椭圆形，淡黄色，具椭圆形的细胞 核。 在视野中仔细寻找巨噬细胞吞噬鸡红细胞的不 同阶段。有的鸡红细胞紧贴在巨噬细胞表面；有 的红细胞已部分被吞入；有的巨噬细胞已吞入 1个 或多个红细胞，形成了吞噬泡。还可见有的吞噬 泡体积已缩小并呈圆形，这说明该吞噬泡已与溶 酶体发生融合，泡内的物质正在消化分解。
捉拿方法：
将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持 其尾巴向后拉，小鼠则会尽力向前蹬。 用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤， 然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。
腹腔注射
给药方法： 小白鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、尾静 脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。我们 常用的是腹腔注射外侧(避开膀胱和血管)用 酒精消毒后，首先将注射针头向头部方向刺入皮下， 进针1～2mm后，再以45°角刺穿腹部肌肉而进入腹 腔(刺穿腹肌时有一落空感)。针头刺入腹腔后切勿 左右摆动，以免损伤肠管或肝脏。注意每次注入的 液体量应为0.1～0.2ml／10克体重。
『思考题』 计算巨噬细胞吞噬率和吞噬指数。
吞噬率%= （吞噬鸡血红细胞的巨噬细胞÷100个巨噬细胞） ×100% 吞噬指数=100个巨噬细胞中吞噬鸡血红细胞的总数÷100个吞 噬鸡血红细胞的巨噬细胞