多因子检测
细胞因子研究思路
药物 细胞因子 抑制剂
病毒
细胞
细胞因子
通过分析细胞因子的量来了解细胞的变化
信号通路
胞内蛋白磷酸化，泛素化等激活下游蛋白实现功能检测
表面分子
表面分子是检测内部分子的关键，也是研究细胞信号通路的关键
凋亡
细胞经过一系列的蛋白变化，凋亡相关指标的检测了解刺激物的影响
另外，如今的研究热点相关的研究也需要多指标检测，如：干细胞、血管生成、肥 胖症相关
Human Th1/Th2 Cytokine Lyophilized Standards IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, TNF, IFNg
Human Chemokine Kit IL-8, RANTES, MIG, MCP-1, IP-10
Human Th1/Th2 Cytokine Kit IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, TNF, IFN-g
分泌细胞因子检测技术方法
蛋白芯片 膜型和孔型 Mosaic ELISA CBA Luminex平台的检测技术 Merck Panomics R&D
广义蛋白芯片技术
蛋白芯片技术的出现给蛋白组学研究带来新思路
固相：膜或者96空板为基质的蛋白芯片和Mosic ELISA （R&D System）
ARZ00 3
Proteome Profiler 96 Human Phospho-RTK Array 3
Includes the following analytes: EphB4, PDGF R alpha, PDGF R beta, Tie-1, Tie-2, VEGF R1, VEGF R2, VEGF R3
在炎症、自身免疫病、变态反应、休克等疾病时，某些细胞因子的 表达量可成百上千倍地增加，例如为风湿关节炎的滑膜液中可发现 IL-1、IL-6、IL-8水平明显高于正常人，而这些细胞因子均可促进 炎症过程，使病情加重。应用细胞因子的抑制剂有可能治疗这为类 症性细胞因子水平升高的疾病。
细胞因子与疾病治疗
96孔板为基质的蛋白芯片
产品列表
货号 介绍
Proteome Profiler 96 Human Phospho-RTK Array 1
ARZ00 1
Includes the following analytes: EGF R, ErbB2, ErbB3, ErbB4, HGF R, IGF-I R, INSR, M-CSF R, MSP R, PDGF R alpha, PDGF R beta, SCF R, Tie-2, VEGF R1, VEGF R2, VEGF R3
ARZ00 2
Proteome Profiler 96 Human Phospho-RTK Array 2
Breast Cancer 8-plex including the following analytes: EGF R, EphB4, ErbB2, ErbB3, ErbB4, HGF R, IGF-I R, MSP R
蛋白质研究技术
蛋白组学研究是即基因组学研究后的生命科学发展的一个 大方向之一
蛋白质研究手段： WB 检测蛋白有无以及是否修饰 IHC/IF 检测蛋白定位 CHIP 检测蛋白之间或者蛋白核酸之间的相互作用 流式技术定量检测细胞表面蛋白或胞内蛋白 ELISA技术
蛋白芯片 流式基础上的CBA Luminex技术平台基础上的xMAP
货号MEA001 目前网上只有一个产品
Mosaic ELISA
是R&D新上市的产品，96孔板为基质，每个孔可以同时 检测8种指标进行绝对定量
节约样本：每孔50ul
节约时间：一次实验的数据相当于8个ELISA试剂盒 每次实验不超过5小时
在相同的环境下检测，数据可比性高
New product is coming！！！
产品列表
货号 ARY001 ARY002 ARY003 ARY004 ARY005 ARY006 ARY007 ARY008 ARY009 ARY010 ARY013 ARY014 ARY015
介绍
检测人的特定位点42种受体酪氨酸激酶（RTKs）的相对磷酸化水平 检测人的特定位点19种胞内丝氨酸/苏氨酸激酶的相对磷酸化水平 检测人的46种胞内丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸激酶的相对磷酸化水平 检测人的59种ITAM/ITIM相关的免疫受体的相对磷酸化水平 同时检测人的36种细胞因子、趋化因子、和急性时相蛋白的相对表达水平 同时检测小鼠的40种细胞因子、趋化因子以及更多因子的相对表达水平 同时检测人的55种血管生成有关的蛋白相对表达水平 同时检测大鼠的29种细胞因子、趋化因子以及更多因子的相对表达水平 同时检测人的35种凋亡有关的蛋白相对表达水平 同时检测人的15种多能干细胞标记物的相对表达水平 检测小鼠的38种肥胖症相关蛋白的相对表达水平 检测小鼠的39种受体酪氨酸激酶的相对表达水平 同时检测小鼠的53种血管生成有关的蛋白相对表达水平
D E F G
H
细胞仪的FL3（近红外荧光） 和FL4（红色荧光）通道检 测，通过这个二维矩阵
I
（对应于微球上的特定序
号）识别捕获微球，从而
定性目的蛋白，PE标记的
检测抗体在FL2通道来对目
FL4-H or Flex Set产品
信号传导类
（磷酸化蛋白）
ERK (T202/Y204) JNK (T183/Y185) p38/MAPK (T180/Y182) PLC-gamma (Y783) ZAP70 (Y319) Syk (Y352) Stat1 (Y701) Btk (Y551) RSK (T573) Itk (Y511) eNos (S1177) ZAP70（Y319） Total Syk Total Stat1
Mouse Th1/Th2 Cytokine Lyophilized Standards IL-2, IL-4, IL-5, IFN-g, TNF
CBA Flex Set
FL3-H or NIR-A
检测原理：
A
1 2 3 4 56 78 9
Flex Set微球带有近红外
B C
和红种荧光，分别在流式
人
IFN-γ IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 IL-8 IL-10 IL-1β IP-10 IL-12p70 LT-α MIG MCP-1 MIP-1 β TNF
细胞因子类
小鼠
大鼠
IFN- γ IL-2 IL-4 TNF IL-10 IL-6 IL-5 IL-12p70
CBA技术原理
一系列荧光强度不同的微球包被有特异性捕获抗体，
与待测样本孵育后，形成“三明治”复合物。
Bead
Capture Ab
Capture Bead
+
+
Analyte of interest
Fluorescent detection Ab
CBA原理图示
不同的目标蛋白
1
不同强度红色荧光
2
的捕获微球，在
多细胞因子检测方法综述
基因公司 王晓丹
细胞因子检测
蛋白质相互作用
细胞因子
细胞间相互作用
疾病研究
细胞因子与疾病
正常情况下，细胞因子表达和分泌受机体严格的调控，在病理状态 下、细胞因子会出现异常性表达，表现为细胞因子及其受体的缺陷， 细胞因子表达过高，以及可溶性细胞因受体的水平增加等。
人类免疫缺陷病毒（HIV）感染并破坏TH后，可导致TH细胞产生 的各种细胞因子缺陷，免疫功能全面下降，从而表现出获得性免疫 缺陷综合征（AIDS）的一系列症状。
Mouse Th1/Th2 Cytokine Kit IL-2, IL-4, IL-5, IFN-g, TNF
Mouse Immunoglobulin Isotyping Kit Heavy and light chain isotypes of mouse IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, IgM, IgE Mouse Inflammation Lyophilized Standards IL-6, IL-10, MCP-1, TNF, IFN-g, IL12p70
•无酶-底物背景干扰
CBA 的两种形式
CBA KIT－固定组合，all-in-one CBA Flex Set－自由组合，随意搭配
现有CBA Kit产品(18个)
Human Allergy Mediator Kit IL-3, IL-4, IL-5, IL-7, IL-10, GM-CSF
Human Allergy Mediator Kit II
更多检测指标 更灵活
CBA与ELISA比较
ELISA •样本用量大，单指标检测 •操作费时费力 •系统操作误差大
•标准曲线人为误差大
•酶-底物背景干扰
CBA
•样本用量少，多指标检测
•操作方便，节省时间
•同一样本同时检测，误差小，精 密度高
•标准曲线自动测定，专用软件自 动计算，检测范围宽，灵敏度 高
FCM FL3检测
3
4
5
6
PE 标记的检测抗体， 在FCM FL2检测。 荧光强度即为靶蛋白 量
CBA特点
同时检测单一样本中的多种蛋白，如细胞因子 无需分批操作，演示蛋白间动态关系 强大软件系统，自动分析，省时省力 检测所需样本量少(5-50ul) 灵敏度2.8pg/ml，重复性好，精密度0.3pg/ml 直标抗体，简单操作 避免由于信号放大带来的假阳性 更好的线性度和更宽的检测范围(5000pg/ml) 可实现高通量分析：96孔板和384孔板
与WB和ELISA比较
WB和ELISA的优点： WB：抗体选择多，只能检测一种样本的一个指标 ELISA：传统的实验方法，多种kit选择
