凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒
Cat Number：For Research Use Only
Store at -20℃for one year
Expire date：
一、试剂盒说明
本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和/或胞浆蛋白，提
取制备过程简便。

制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性，并且纯度较高。

提
取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、
免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性测定等后续蛋白质研究。

二、试剂盒组份
组份KGP150 （50 test）KGP1100 （100
储存温度
test）
Buffer A 25 mL 25 mL ×24℃
Buffer B 1.5 mL 3．0 mL 4℃
Buffer C 12.5 mL 25 mL 4℃
DTT 50μL100μL-20℃蛋白酶抑制剂250μL500μL-20℃
PMSF（100mM）400μL800μL-20℃三、操作步骤
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1、组织样本，将组织剪切成小块，加入适量的冰冷PBS均浆后，静置5 min ，
弃沉淀，小心吸取上清转移至另一离心管中；
2、上清4℃离心500×g，3 min，弃上清，估计细胞压积PCV（离心后的
紧实细胞体积）；
3、每20μL细胞压积中，加入200μL预冷的Buffer A【使用前每mL Buffer
A加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂】，最大转速涡
旋剧烈振荡15s，放置冰上10～15min；
4、加入11μL冷Buffer B，最大转速涡旋剧烈振荡5s，放置冰上1min；
5、再次最大转速涡旋剧烈振荡5s后，4℃离心，16000×g,5min；
6、尽快将上清转入另一预冷的洁净微量离心管，置于冰上，即得胞浆蛋白；
7、在离心沉淀物（细胞核）中加入100μL预冷的Buffer C (使用前每mL
Buffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂)，最大
转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上40min，每间隔10 min涡旋剧烈振荡
15 seconds；
8、4℃离心，16000×g,,10min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管，
即得核蛋白；
9、上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Braford法或BCA法），
分装并保存于-80℃，避免反复冻融。

Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1、取培养细胞5×106～1×107个/mL，4℃离心，500×g,3 min收集细胞，
弃去培养液，用预冷的PBS洗涤两遍；
2、用移液枪尽可能取去上清，勿留残液，估计细胞压积PCV（离心后的紧
实细胞体积）；
3、每20μL细胞压积中，加入200μL预冷的Buffer A【使用前每mL Buffer
A加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂】，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上10～15min；
4、加入11μL冷Buffer B，最大转速涡旋剧烈振荡5s，放置冰上1min；
5、再次最大转速涡旋剧烈振荡5s后，4℃离心，16000×g,5min；
6、尽快将上清转入另一预冷的洁净微量离心管，置于冰上，即得胞浆蛋白；
7、在离心沉淀物（细胞核）中加入100μL预冷的Buffer C (使用前每mL
Buffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂)，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上40min，每间隔10 min涡旋剧烈振荡
15 seconds；
8、4℃离心，16000×g,,10min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管，
即得核蛋白；
9、上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Braford法或BCA法），
分装并保存于-80℃，避免反复冻融。

四、注意事项
1、所有的试剂及器具均需预冷后使用；
2、细胞的数量不应少于0.5×107个/mL；，
3、以上各缓冲液的使用量是以20μL细胞压积为例，如细胞压积不同，
4、
大量的提取蛋白或后续试验结果不理想，则需要将提取的蛋白样品进
行透析脱盐，建议使用凯基透析Buffer (Cat: KGB—P001)透析后进
行后续分析。