磷酸二酯键
继续延伸
CH2o C--- G
dNTPHHFra bibliotekHH
3’ 2’
OH
o- P o
o CH2o A -- T
dNTP
HH
H
H
3’ 2’
OH H
CH2o G--- C
ddNTP
H H
H H
3’ 2’
HH
磷酸二酯键 无法形成
o- P o
o CH2o T -- A
dNTP H H
H
H
3’ 2’
OH H
双脱氧法
AACAGCT T CA
T
3’
荧光标记ddNTP法
Sanger简介
1977年，英国人Fred Sanger 发现， 如果在DNA复制过程中掺入ddNTP，就 会产生一系列末端终止的DNA链，并能 通过电泳按长度分辨。
不同末端终止DNA链的长度是由掺入 到新合成链上随机位置的ddNTP决定的。
由此诞生了以Sanger命名的测序原理 即双脱氧链终止法测序原理。
dNTP和ddNTP
ooo
o- P o P o P o CH2 碱基
o- o- o-
o
H H ddNTP
2’，3’-脱氧核糖核苷酸
H
3’
2’
H
HH
ooo
o- P o P o P o o- o- o-
2’-脱氧核糖核苷酸
CH2 o 碱基
H H
3’
OH
H H
2’
H
dNTP
双脱氧末端终止
正常延伸
延伸终止
双脱氧法
测序反应
DNA Template 5’
3’ T
ddNTP
ACTT CG A C A A
5’
T
CT G A
G
T
G
A
荧光检测
A
G
C
T G
T
T
Large fragments 毛细管电泳
Small fragments
T C G A
荧光检测结果：5’→3’
A
T T GT CGAAGT G
DNA测序结果：3’→5’