1、适用范围本设备配备ACQUITY UPLC液相色谱仪、ＴＱS ＭS/MS 质谱仪,适用于食品、药品中各种有机物得定性、定量分析,就是一种具有高灵敏度得检测仪器,仪器由主机、计算机与数据处理软件等组成、2、职责2.1操作人员按照本规程操作仪器,认真填写实验使用记录、２、２保管人员负责对仪器进行定期维护与保养。

2.3科室负责人负责监督检查规程得执行。

3.操作程序日常操作步骤:准备UPLC —→设置样品表—→运行样品—→定量—→打印报告、注:如果一个星期内不运行样品请不要关质谱仪,使其保持真空。

建立新方法与proｊeｃｔ得操作步骤:准备UＰLC-→建立新得project —→用标准品调谐—→编辑质谱方法-→编辑UP ＬC方法—→设置样品表—→运行样品—→定量—→打印报告、3。

1开机:3.1.１彻底开机顺序(仪器已关闭)确定MS及其它仪器电源电缆已连接,开氮气发生器、开氩气,小表〈0。

1mｐa。

打开计算机电源〉等待windｏws正常启动＞电脑界面右下角网络图标红叉。

打开UPＬC自动进样器电源,等到电脑界面右下角网络图标出现感叹号！、打开ＵPLC泵电源,等约3０s或者就是有响声。

打开质谱电源,等待5min,离子源透视镜里面亮。

打开Ｍasｓlynｘ软件,mａsslynx主界面—-——－左侧ｉｎstruｍent—--—Maｓs tune－-－界面菜单栏vａcｕum——-pｕmｐ同样界面左侧偏上dｉagnosｔｉc ｓ—--vacuｕm—－－aｎalyser MＳ１ｔurbo speｅｄ［%］要在5分钟内升到８0。

至少抽真空4个小时〉查瞧真空状态主界面mass ｃonｓoｌe--—界面左侧xeｖo tq ms ｄeｔectoｒ加号展开——-ｍs diｓｐlay > 碰撞室真空度〉达到7、ｘｅ-5mbａr。

３.1．２日常开机顺序(仪器未关闭)开氮气发生器、开氩气,小表＜0.1mpａ,打开Masslynx软件,进入工作站。

３、２建立项目点击file下得projｅcｔｗizard ,出现对话框,单击yｅs 出现对话框,输入proｊecｔ,ｌocａｔioｎ为Ｃ:\MS ＤＡTA ,单击next ,选择cｒeａte exiｓtiｎg ｐrｏject as ｔｅmｐlａte,并以ｃ:\ｍａｓsｌｙnx\dｅfaｕlt、pro 为模板,单击ｆiniｓｈ.点击OK。

３。

３准备ＵＰＬC系统准备液相得一般流程:准备流动相> 准备样品〉灌注二元泵＞灌注自动进样器〉建立液相方法> 平衡液相３．3.1.准备流动相用0、22ｕｍ得膜过滤缓冲液,所有得缓冲液与超纯水都要新配制,超纯水与缓冲液使用不得超过二天,缓冲盐一定要就是可挥发得,而且浓度不要大于1０ｍＭ。

3。

3.2、样品要求所有样品都要用流动相初始梯度比例得溶剂来溶解,并用0、22um得膜过滤、3.3．３灌注二元泵在Mａsslynｘ主界面,单击MS Coｎｓｏlｅ,进入ＵPＬC交互显示界面,点击左栏ＡcquitｙＵPＬC Sysｔem>Control〉Ｓtart Up System ,单击ＱSM,选择需要用到得流动相位置,如A 与Ｂ,选择seal wash,时间设为３分钟。

单击SM,选择Stroｎg Wａsh 5 cycｌes, Ｓaｍple syｒiｎgｅ20单击ＥqｕiｌibrａｔｅtｏMetｈod,将流速设为0 ,单击Stａrｔ开始灌注.时间大约为9min 左右、设定流速,平衡液相在Ｍａsｓlynx主界面,单击ＩnleｔMetｈod 图标,打开液相方法编辑窗口,单击ｓtatｕs＞ACＱＵＩＴY AdｄitionaｌSｔatus,进入液相控制台,单击A 或Ｂ或流速得位置,出现流速、比例设定对话框, 设定液相流速与比例,单击对勾,开始平衡液相,如果后面要做调谐,可设定流速0.2ml/min,有机相与水相得比例为50:50。

3。

4 准备质谱3。

４.１、计算化合物单同位素质量数Mａssｌynx主界面＞单击Tooｌs〉MoleｃuｌarＷｅｉght Caｌculator, 输入化合物得分子式(大写—注意Cl、Ｂr等正确得输入方法) ,注意选单同位素Moｎｏiso ,Ion Ｍode:离子化模式,+ve 正离子,-ｖe 负离子,单击Cａlculａtｅ。

3．4.２用Inteｌliｓtａrt进行自动调谐在Masslyｎｘ主界面单击ＭS Tunｅ图标,打开调谐窗口,单击Ion Ｍｏde＞ES+ 或ＥS－,单击API Gａs图标打开氮气, 单击打开高压选择ＭS Moｄe 图标,设定液相流速0.2ml/min, 水:乙腈得比例为50:5０。

把标准品调谐液放入质谱仪塑料瓶位置处得Ａ(或B或C)号位(注:浓度在200ppb左右)单击Fluidicｓ,选择Resｅrvoｉr为A ,Ｆlow Staｔe 为ＬC模式,点击Ｐｕrge 图标。

Ｐurge结束后,将Ｆlｏw Staｔe 改为Cｏｍbｉｎe 模式,设定Funｃtion为ＭS １sｃａn, Masｓ为计算出化合物得质量数,ｓpan 为５,点击进样,开始进样,直到离子得响应比较稳定。

保存调谐文件:Filｅ〉SavｅAs至已建得项目下。

在Masslynx主界面,选择Ms Consｏle> Xeｖo ＴQ MＳＤeteｃtoｒ选择Intellｉstarｔ,选择SampｌｅＴune aｎd Dｅvelop Mｅｔhod ,ES+单击Start 图标,出现Ｉntｅlｌisｔart 自动调谐编辑窗口,选择Sｗｉｔch to Aｄvanｃedmｏdｅ,输入Coｍpounｄｎame (化合物名称) ,Moleculａr Mass/Ｆormuｌa (分子量或分子式) Adduct A+(［M+Ｈ］+, 选择LｏaｄExiｓtiｎg SampｌeＴunｅ,在SamplｅTune Ｎame 方框后得“。

"处调用开始保存得调谐文件,在DeveｌoｐMＲM Method前得方框打钩,并在方框出输入MＲＭ方法得文件名,路径为已建得项目下。

在Priｎt Rｅｐort 前方框打钩,Cone Vｏltａge,Ｃoｌliｓion Enｅrgｙ处为默认值,Fluiｄics 下得Ｆlow Path 选择bｉnｅｄ模式,Sａmple Reservｏir 与SaｍplｅFｌow Rate 参数与Ｆulｄics 下Ｃombined模式下得进样参数保持一致、单击右边得Start 开始自动调谐。

调谐成功,会有绿勾出现,查瞧intellisｔａrｔ报告3。

4。

3查瞧ｉntｅllistａｒt 中自动生成得质谱方法:从MassＬｙnx主窗口,单击MS Meｔhｏd,出现MＳMｅthoｄ编辑对话框,选择Fiｌe 〉ｏｐｅn, 选择Intｅllｉsｔａｒt中保存得质谱方法得文件,双击方法,如发现自动调谐生产得质谱方法中部分参数有误,则可以在Cｈａnｎｅｌｓ窗口手动修改参数,填写relｅntinoｎwiｎdow 中得enｄ时间,此时间必须与液相色谱方法运行时间保持一致,选择AutoＤｗｅll,单击OＫ,点击Fｉｌe> Sav ｅAs,保存质谱方法文件。

3、5建立液相方法３.５。

１编辑液相方法在液相方法编辑窗口,单击Iｎle t ,输入溶剂名称,ｒｕn ｔiｍe及梯度洗脱程序,梯度洗脱程序中最后阶段时间必须与ｒun ｔｉｍｅ符合,单击OK, 选择Ｆile＞Save As保存方法,单击Load Ｍethod ,平衡液相。

3。

５.2建立样品列表在Ｍａssｌynx主窗口,选择File 〉New 建立一个空白得表ｓampleliｓｔ。

输入文件名,样品信息,双击MS Ｆile ,选择质谱方法,双击Iｎlet Filｅ, 选择液相方法,在Ｂottle 中输入样品瓶得位置,在Inject Volume中输入进样体积,可右键〉Add, 增加样品表得行数,保存样品表:Ｆｉle > Ｓave As 。

3.６数据采集与处理3.6．1、选中要采集得样品,单击Ｒun > Ｓtart ,选择Acquiｒe Sample Datａonly,,单击OＫ开始进样并采集、3.６。

2在采集过程中,可查瞧色谱图,点击Ｃｈroｍatogram窗口,点击Reａｌ—tim ｅUpdａｔe iｃon 。

如果不能见整个ＴＩＣ图,单击DefaｕｌｔRange 图标。

如果方法中包括多个通道,可通过Dｉsplaｙ〉Ｍass 查瞧如果方法中包括多个检测器或多个Function,可通过Display ＞TIＣ查瞧3.６。

3处理多个Ｆunｃtion得数据如果质谱方法中有多个Funｃtion,如有三个Ｆunctioｎ,如想瞧第二个Fuｎctｉo ｎ,MS Ｓcａｎ得数据。

3。

６.3。

1 在色谱图窗口,点击Ｄisｐｌay ＞ＴＩC,选中MＳSｃan ,选择Add trace ,单击OK。

3。

６．3.2如想查第二个Funcｔｉoｎ, DaughtｅrＳcan 质谱图,在色谱图中,选择Ｄｉsｐlay ＞TIＣ, 选择ＳcanＷaveＤSＡdd ｔｒａcｅ,单击ＯＫ。

３。

6．3。

3、选择Ｐrocess ＞Coｍbinｅspectra。

分别用右键输入信号与本底噪音。

单击OK、得到Dａuｇｈtｅr Ｓcａn得质谱图,单击Proｃe ｓs>Smoｏth…,单击OK、3.7数据处理－外标定量法３．7.1在Massｌynx主页面单击Targｅtｌynx/Ｅdiｔｍｅthｏd,出现定量方法编辑对话框,单击新建方法图标,新建一个定量方法。

3。

7.２单击Aｄd new coｍpouｎd (添加新得化合物)图标,添加一个新得化合物。

3.7．３单击菜单栏updatｅ,选中Qｕaｎｔiｔatｉｏn Ioｎ与CｏmｐounｄName(前面打勾)在Massｌynx 主页面,打开中等偏下低浓度标准品得色谱图,Diｓpｌａy/Masschrｏmatogｒａm选出要定量得化合物得离子对,一般强度高得化合物用来做为定量离子,另一个离子对则作为确证离子,用鼠标右键在定量离子对色谱图上拉一下,则pｏunｄname, Ａcquisition Fuｎctｉon Ｎumber,Quantificaｔｉｏn Ｔrace, Preｄicｔｅd Reｔenｔｉｏn Ｔime与ReｔeｎtioｎTime wiｎｄow 将自动输入到定量方法中。

注意:在色谱图上拉得时候,要遵循两个原则,拉得位置要以色谱峰得峰尖左右对称,拉得宽度要超过峰得起点与终点、３。

7。

4单击工作曲线图标,在工作曲线设置页面,填入Concｅntration Uｎitｓ:浓度单位,例如ng／ml, ug／kg,ppb,ppm等。

Concｅntｒatｉon of Standard: Leｖｅl–选择Cｏnc。