MCP测定方法（修改）
1．试剂: 1) 0.25N的NaOH溶液==0.25mol/LNaOH==40g/mol×0.25mol/L==10g/L
2) 0.1mg/mL的牛血清蛋白(BSA)
3) 考马斯亮蓝溶液(G250，95%乙醇，85%磷酸溶液，双蒸水)
2．考马斯亮蓝的配制：
100 mg考马斯亮蓝G250，溶于50 mL95%乙醇（保证充分溶解）
然后加入100 mL85%磷酸溶液（w/v）（浓磷酸），最后用双蒸水定容到1 L
过滤后使用，4℃避光保存，保质期为1周。

(看准是G250还是R250)
3．步骤：
1. 样品解冻
2. 涡旋振荡45 s-1 min，将微生物和食糜分离
3. 取3.0 ml混合液，4℃离心1,000-800 rpm，8 min，
4. 吸取上清液1 mL于1.5 mL离心管中，13,000转，4℃离心20 min
5. 弃上清，底物中加入1 mL 0.25 N NaOH混匀后吸取到7mL或者10mL离心管中（重复三次），
6. 100℃水浴10 min
7. 吸取1mL液体样品于4℃离心13,000转，35 min
8. 吸取上清液500 uL于7 mL离心管中，加入5 mL考马斯亮蓝，混匀
（上清液要稀释，否则读数超出标准曲线的范围，稀释方式比如500 ul=60 + 440 ul H2O。

）
10. 于波长595 nm处用722分光光度计比色
11. 比色杯用95％乙醇洗净，再用水洗3次
4．制作标准曲线：
1、从－20℃取出0.1 mg / mLBSA，室温融化后，备用
2、取21个7 mL离心管，3个一组，分别标记为0 ug，2.5 ug，5.0 ug，10.0 ug，20 ug，40 ug，
50 ug。

3、按下表在各管中加入各种试剂
5、混匀后，室温放置2 min.
在生物分光光度计(Bio-Photometer, Eppendoff) 上比色(595 nm)分析。