HIV抗体检测
试剂盒本身的问题 n 最好选用经国家药品监督管理局批准或注册， 以及中国药品生物制品检定所批批检合格，国 家艾滋病预防与控制中心参比实验室评估质量 优良的试剂。 n 要注意所用试剂盒的效期，一定要使用有效期 内的产品。 n 在效期内的试剂盒要注意批号，因为不同批号 的试剂盒中有一些试剂是不能混用的。
HIV抗体检测
实验开始前准备工作 n 酶标板、稀释液等需要一定的室温平衡时间，所以
一定要在上机前提前从冰箱中取出
HIV抗体检测
加样环节 n 仪器加样：要选择一次性吸头，不要用钢针加样；
样本离心时间要充分，离心后要观察是否还有凝块， 及时处理，以免引起加样误差导致的假阴性。 n 手工加样
HIV抗体检测
温育条件 n 如果加样后温育时采用水浴法，注意水面不要没过
酶标板，酶标板不能叠放，以免温度不均，放置酶 标板前应将温度提前调至实验所需温度，以免温育 时间不够，封板用的膜不能反复使用。
HIV抗体检测
洗板问题 n 洗板时洗板次数、浸泡时间及洗液量要完全按照说
明书要求设定，另外，要经常通一下洗板机的吸液 孔，以防被洗液中的结晶或是标本中的纤维蛋白丝 堵塞，确保洗板时所有洗液孔和吸液孔工作状态正 常，否则由于洗板不干净可能造成假阳性结果。
室间质评
n 质量控制是临床检验的最重要的环节，所以除了每天 做好室内质控外，还要参加卫生部临床检验中心以及 CDC的室间质量评价活动
快速检测试剂
n 与ELISA和发光法相比，快速法所需时间短，一般半小 时内即可报告结果，快速检测试剂敏感性和特异性均 低于酶联免疫试验试剂，仅用于某些特定条件下。对 于酶联免疫试验中吸光度值较低的感染者可能用快速 条很难判断结果，容易漏检。另外由于其特异性低于 酶联免疫试验，所以临床检测中也存在快速检测阳性， 而酶联免疫试验阴性的结果，造成了受检者不必要的 恐慌。
开展HIV抗体检测需具备条件
n 经省级卫生行政部门批准 n 具有专门的实验室，并且要把清洁区和污染区分开 n 具有2名以上检验人员，且必须经过国家级或省级培
训合格 n 具备必须的仪器设备，如酶标仪(发光仪）、洗板机、
冰箱、移液器等
试剂和样品
n 必须是经国家食品药品监督管理总局注册批准、 在有效期内的试剂。推荐使用临床质量评估敏感 性和特异性高的方法及试剂。
第五代 在第四代优势基础上，进一步区分是抗体还是抗原阳性。
Future Microbiol. 2009, 4(8):963-82.
HIV感染进程及相关标志物
艾滋病实验室检测依据
n 所有艾滋病检测实验室按照《全国艾滋病检测工作 管理办法（2006年）》、《全国艾滋病检测技术规 范（2015年修订版）》和《艾滋病和艾滋病病毒感 染诊断标准WS293-2019》要求开展检测工作。
灵敏度和特异性提高。只能检测IgG
重组蛋白和合成肽段作为抗原，同时，酶标同样的抗原，“双抗 原夹心”
灵敏度和特异性进一步提高。可同时检测IgG和IgM
在第三代试剂基础上，增加了针对检测p24抗原的单克隆抗体，增 加了感染早期（即HIV血清转换期）的检测灵敏度。同时检测IgM、 IgG抗体和p24抗原
质量控制
u 试剂盒内部对照 试剂盒内部提供的阳性和阴性对照，用于判断每次 实验的有效性，不能作为室内质控品使用，每一次 检测临床样本时，必须有试剂盒内部对照，而且只 能在同批号的试剂盒中使用，如内部对照结果无效 ，必须重新试验。
质量控制
u 室内质控品(外部对照) u 质控品定值必须为弱阳性。外部质控品的作用是判
n 无症状期：可从急性期进入此期，或无明显的急性期症状而直接 进入此期。持续时间一般为6～8年。
n 艾滋病期：为感染HIV后的最终阶段。患者CD4+T淋巴细胞计数多 <200个/μl，HIV血浆病毒载量明显升高。此期主要临床表现为 HIV相关症状、体征及各种机会性感染和肿瘤。
初筛常用检测方法
u 酶联免疫吸附试验（ELISA） u 化学发光或免疫荧光试验（CIA/IFA） u 快速检测（RT）及其它试验
n 样品可采用血清、血浆、全血、滤纸干血斑、口 腔黏膜渗出液和尿液。
生物安全
n HIV病毒属第二类病原微生物，是高致病性病原微生 物，所以相关检测应在符合Ⅱ级生物安全实验室进 行。要做好实验人员的个人防护，要经常对试验区 域进行消毒处理，一旦发生职业暴露应按照相关流 程进行处理。
窗口期
n 从HIV感染人体到感染者血清中的HIV抗体、抗原或核 酸等感染标志物能被检测出之前的时期。感染者体内 的HIV数量会在这时达到一个峰值，传染性极强。急性 感染期也出现在这段时间。但在各感染期都可能会传 播艾滋病毒。窗口期内的血液已有感染性，现有检测 技术检测HIV抗体、抗原和核酸的窗口期分别为感染后 的3周、2周和1周左右。
临床表现与分期
n 急性期：通常发生在初次感染后2～4周。部分感染者出现HIV病毒 血症和免疫系统急性伤的临床表现。大多患者临床症状轻微，持 续1～3周后缓解。临床表现以发热最常见，可伴有咽痛、盗汗、 恶心、呕吐、腹泻、皮疹、关节疼痛、淋巴结肿大及神经系统症 状。此期在血液中可检出RNA和p24抗原，而HIV抗体则在感染后2 周左右出现。
断该批临床样品检测的可信性。室内质控品可以购 买或实验室自行制备。每次试验必须包含质控品， 出现失控时，必须重新试验。 u 绘制质控图
质量控制规则
u 警告（12S）:当外部质控品的S/CO值超出×±2S范 围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继 续检测需要进一步观察。
u 失控（13S）:当外部质控品的S/CO值超出×±3S范 围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能接受 ，可能是系统误差、随机误差或外部质控品稳定性 下降所致。
第五代HIV抗体试剂临床应用
宋淑静
HIV抗体检测技术的发展
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
试剂 第一代 第二代 第三代
第四代
Yea 19 19 19 19 20
Gerne 85 87 91 97 15
ratio 1st 2nd 3rd 4th 5th
n
特点
病毒裂解粗提物作为包被抗原
比较灵敏，但特异性较差。只能检测lgG
重组蛋白和合成肽段作为抗原。