3 保护稀有珍贵植物及濒危植物的种植资源 4 保持不稳定性的培养物，如单倍体 5 保持培养物如悬浮细胞、愈伤组织的形态发生和再生 能力 6 便于国际间交流 7 冷冻和解冻过程中可以起到离体筛选所用，是筛选抗 逆特别是抗寒作物的一个潜在途径
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作业
1 冷冻保存的程序中主要包括几个步骤？ 2离体无性系冷冻保存意义？
5 解冻和重新培养 （1）解冻 一般措施：把材料从液氮罐中取出投入 30—40度水浴锅中（速度500-750度/分 钟）。 （2）清洗 A 目的：去掉冰冻保护剂，降低渗透压 B 清洗液一般为液体培养基
清洗有坏处吗？为什么？如何应对？
（3）培养物的存活率：
A 理论存活率的公式：
重新生长的细胞或器官组织数目/解冻的细胞或器官组织数目
3 离体无性系贮存的两种方法： （1）冷冻保存 （2） 低温贮存
国家种质资源库

国家种质库是全国作物种质资源长 期保存与研究中心。该库在美国洛 克菲勒基金会和国际植物遗传资源 委员会的部分资助下，于1986年10 月在中国农业科学院落成，隶属于 作物品种资源研究所。
国家种质库保存资源的对象

保存对象：凡能通过种子繁殖维持物种遗传完整性的各类植物 种质资源，都可保存到国家种质库，其种子应是耐低温和耐干 燥类型，即正常型种子（orthodox seeds）。
冷冻降温 贮存 解冻 重新培养
二 冷冻保存 3低温对细胞的伤害和冷冻保护剂的必要性 （1） 低温对细胞的伤害： A 细胞内冰晶形成引起细胞破裂， 造成物理理损伤 B 自由水冷冻后引起细胞脱水，造成 生理伤害 （2）冷冻保护剂的作用： A 提高溶液的粘滞性，防止细胞内大 冰晶的形成，防止物理损伤 B降低冰点，促进细胞胶质的“玻璃 化”态形成， C 稳定细胞内大分子物质的正常结构 特别是膜结构，阻止低温对其伤害

中国科学院西双版纳热带植物园热带植物种质资源库 ( 原“珍稀濒危特有植物种质资源库”)

以种子和植物组织体为基本材料， 收集、评价、保藏和分发我国热带、 亚热带重要植物资源特别是稀有濒 危特有植物种质资源
IRRI
International Rice Research Institute
二 冷冻保存 1 定义 通过一定处理，把离体无性系保存在液氮中，使 培养物的活动处于停滞状态，达到种质保存的目的。 2 程序或步骤： 材料予处理

贮存条件：温度-18℃，相对湿度低于50%。根据理论上推算， 含水量为5-8%的种子，在上述贮存条件下，其寿命可延长到50 年以上。发芽率监测结果表明，库存大部分种子经过15年贮藏， 其发芽率没有出现明显的下降。因此，低温贮藏是目前种子体 种质的最佳保存途经。
位于北京中国农业科学院大院内的新建成“国家农作物种质保 存中心”保存设施，于2002年投入使用，使国家种质库长期贮 存总容量增加到60～70万余份。因此，凡能通过种子繁殖维持 物种遗传特性的植物种子都可送国家种质库保存。
二 冷冻保存 4 冷冻前的预处理 （1） 预处理的必要性： 调整生理状态（如渗透压的调整）
（2）采取的一般措施： 加入冷冻保护剂培养一段时间
3 取材： 1 分生能力较强的细胞或组织 A 茎尖 B 胚性愈伤组织 C 处于延迟后期或对数生长期的悬浮细胞
5 冷冻降温 （1）冷冻降温的几种方法： A慢冻法 ： 温度下降速度为0.1-1摄氏度/分钟 B快冻法： 温度下降速度为50-1200摄氏度/分钟 C 分步冷冻法： 先用慢速把温度降低到-30 ~ -50度，停留 一段时间，然后再快速投入到液氮罐中。 事实上在实际操作过程中，三种方法没有明显的区分， 大多数联用。
B 实际测定存活率的公式（方法）：
冷冻后的细胞活力/冷冻前的细胞活力
C 实际测定存活率的方法：
荧光素双醋酸酯（FDA）法、 氯化三苯四唑（TTC）法 、 伊凡蓝法
三 低温保存
主要用于芽 苗的保存，费用低廉，时间较短
还会有那些保存方式？
四 离体无性系冷冻保存意义 1 长期保持种质的遗传稳定性 2 长期保存去病毒的物无性系冷冻的意义 五 课后问题
一 引言
1 利用种子进行种质保存的优缺点： 优点：空间小，保存多年，易于干燥和包装 局限性：随着贮存时间的延长种子的生活力下降，病虫害侵袭。 除了无融合生殖物种以外，难以保存各种来源不同的 无性系； 不适用于营养繁殖的作物。 2 利用离体无性系培养物进行进行种质保存的优点： （1） 空间小 （2） 不受病虫害侵袭 （3） 可以快速扩繁 （4）便于国际间种至交流