4.植物组织培养过程
植物细胞培养 离 体 组 织 或 细 胞 细胞分裂素> 生长素
脱分化
细胞分裂 素≈生长 素
不需要光
愈 伤 再分化 组 织
芽
根
植 物 体
细胞分裂素< 生长素 需要光
5.植物组织培养的应用
（1）培育无病毒植株 （2）培养紫草愈伤组织,提取紫草素（治疗烫伤和割伤的 药物以及染料和化妆品的原料）
你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？
每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设 置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基 的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用 以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
（四）培养
接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养。培养期间应定期 消毒。培养温度18~22℃，每日用日光灯光照12h。
都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
2.无菌操作要求 操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后， 3.材料的切取和接种
4.接种注意事项
①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为70％的酒 精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后 再接种 ②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥 形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4块，菊的茎或叶6－8块， 也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件 ③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培 养基利于吸收水分和养分
MS培养基 主要成分 包括：
A、大量元素: N、P、 S 、 K、Ca、Mg等 B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等 C、有机物、植物激素
（3）植物激素的影响
①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤 霉素
生长素类： 2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸 （IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA） 细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤（ 6－ BA）、玉米素（ZT） 赤霉素类：赤霉酸（GA3）
若在无菌室中培养，提前用甲醛熏蒸房间。培养条件如上。
（五）移栽
移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养 1.打开封口膜： 瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日 用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过 2.清洗转移： 毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间 珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培 3.移栽： 幼苗长壮后，移栽到土壤中
由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不 必添加植物激素
3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行 高压蒸汽灭菌
（二）外植体消毒 1.选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 2.消毒 ①流水冲洗 菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软
刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右
②酒精处理 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体
积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s， 立即将外植体取出，在无菌水中清洗
③消毒液处理 取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，
放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min， 取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液
2.消毒
70% 的酒精
氯化汞
（三）接种
1.接种室消毒
污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消 毒射20分钟
1、配置各种母液
①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温 保存
②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml 的质量浓度单独配制成母液
③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数， 计算用量
2、配置培养基
① 配制培养液
② 调PH
③培养基的分装 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml
2.植物组织培养条件
必要条件 细胞离体
一定的营养物质、激素和其他外界条件
植物激素 无机盐 适宜条件 糖类 无菌、温度、光照… 原理: 细胞的全能性 离体
3.影响植物组织培养的因素
（1）植物材料的选择 A、植物材料的选择直接关系到实验的成败 烟草和胡萝卜的组织培养较为容易 枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 B、同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果 菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝 （2）不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相 对特殊，需配置适宜的培养基
（六）栽培
幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况， 适时浇水、施肥，直至开花
1. 植物细胞全能性表达的条件有哪些？ 提示：①离体； ②一定的营养物质、激素等； ③适宜的外界条件。 2. 讨论并回答脱分化的实质是什么？ 提示：已分化的细胞回到未分化状态。
3. 植物组织培养过程中为什么要严格进行无菌操作？ 提示：由于植物组织培养的培养基中加入了一些有机
专题3 植物组织培养技术
课题1 菊花的组织培养
1.了解植物组织培养中各阶段的变化 2.了解影响植物组织培养的因素 3.理解植物组织培养的基本原理和基本技术
以视频为背景材料，设计问题，导入新课介绍组培的 优越性；接着直接阐明植物组织培养的基础知识和原理， 再讲授组织培养的操作过程和注意事项。结合形象的图片 ，使内容呈现更为清晰明了；通过结果分析和课题延伸， 完善内化课堂知识。 通过添加典型实例，结合情景图片设置相关问题，层 层深入，以此来突破无菌操作流程这一重点内容；组织培 养的基本操作过程，是本节内容的难点，结合图示，设计 问题，并总结规律，由此突破这一难点内容。
③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例对植物细胞 发育方向的影响
生长素 > 细胞分裂素：有利于根的分化 生长素 < 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑制根的 分化
生长素 ＝ 细胞分裂素： 促进愈伤组织生长 （4）pH、温度、光照 pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每日用日 光灯照射12h
组织培养简介
植物组织培养:是指在无菌和人工控制的环境 条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、 组织及细胞进行培养，使其再生完整植株的技术。
一、组织培养的基础知识
1.相关概念 （1）细胞的分化： 在个体发育过程中，由一个或一种细 胞增殖产生的后代，在形态、结构、 生理功能上发生稳定性差异的过程
物，使一些异养型的细菌很容易在培养基上生存，它们的
生长繁殖与所培养的植物细胞争夺营养，同时细胞代谢产 生一些有毒物质，导致培养物腐烂。
4. 分析植物组织培养过程中每日用日光灯照射12 h的原因。
提示：再分化过程中，细胞中叶绿素的形成需要光。
菊花的组织培养
（2）细胞的全能性： 已经分化的细胞，仍然具有 发育成完整个体的潜能
（3）外植体： 离体的器官、组织、细胞
（4）愈伤组织：细胞排列疏松而无 规则,是高度液泡 化的、成无定形状 态的薄壁细胞
（5）脱分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行 培养，又可以重新分化成根或芽 等器官的过程 （6）再分化： 由高度分化的植物组织或细胞产 生愈伤组织的过程，也叫去分化
（3）诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力的胚状结 构，包裹上人造种皮，制成人工种子，可以解决有些作物 品种繁殖能力差，结子困难或发芽率低等问题 （4）基因工程中亦需用到植物组织培养的方法
二、实验操作
（一）制备MS固体培养基
MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4。C保存 配制好的培养基母液来制备
②生长素和细胞分裂素作用 植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再 分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素 的作用呈现加强的趋势
使用顺序 先使用生长素，后使用细胞 分裂素 先使用细胞分裂素后使用生 长素 同时使用 实验结果 有利于细胞分裂，但不利分 化 细胞既分裂也分化 分化频率高