种子染色时间与四唑溶液浓度有关。
浓度增加，染色反应所需时间也随之缩短，从染色效果看，以较低浓度为宜；
测定时，要求四唑溶液的 ph 值在 6 ～7 范围之内。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
5、所需试剂
△ 配制方法
称取 1 g 四唑粉剂溶解于 100 ml 磷酸缓冲溶液中，即配成
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
5、所需试剂
① 四氮唑：2,3,5-氯（溴）化三苯基四氮唑
（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride or Bromide ）
简称：四唑或红四唑 △ 理化性质


缩写：TTC， TTB，TZ
白色或淡黄色的粉剂，熔点243℃； 当温度达到245℃时就会分解，易溶于水，具有微毒； 遇到直射光线时会被还原成粉红色，
④ 过氧化氢溶液
用于某些牧草种子（黑麦草）的预湿浸种，加快酶的活化和吸胀。
⑤ 杀菌剂和抗生素
延缓衰弱种子的劣变进程。
⑥ 胶液硬化剂
有些种子浸种后，种皮表面出现胶液而变得非常光滑，难以拿牢进 行样品准备。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
6、测定程序
（1）预处理
预措：是指在种子预湿前除去种子外部的附属物和在种子
（4）鉴定前处理
① 直接观察，不需处理 ② 轻压出胚，观察鉴定 ③ 扯开营养组织，暴露出胚 ④ 切去一层营养组织，暴露出胚和活的营养组织 ⑤ 沿胚中轴纵切 ⑥ 沿种子中线纵切 ⑦ 剥去半透明的种皮或种子组织
⑧ 剥去种皮和残余营养组织
⑨ 切去切面碎片或掰开子叶 ⑩ 乳酸苯酚透明液的应用(便于小粒种子观察)
1、发展简史
1942年由德国H. Lakon发明 1950年ISTA成立四唑测定技术委员会
1953年ISTA世界大会第一次将四唑测定列入国际种子检验规程
1984年，650多个属和种
《四唑测定手册》（Handbook on Tetrazolium Test），Moore，
1995年我国将四唑测定列入农作物种子检验规程
a) 不需预湿和附加准备：如苜蓿种子 b) 采用缓慢预湿后不需样品准备：如大豆种子等
c) 穿刺或切开胚乳：小粒牧草等种子
d) 沿胚纵切：水稻、玉米、和麦类等 e) 近胚纵切：松柏和伞形科等植物种子 f) 上半粒纵切：莴苣和其他菊科等植物种子
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
（2）染色前的样品准备
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
2、原理
无色的的三苯基四氮唑被种子吸收后，在胚部活细
胞中脱氢酶的作用下，还原成为红色的、稳定、不扩散
的三苯基甲 ，这样，就可根据染色的部位和深浅来区 分种子红色的有生活力部分和无色的死亡部分。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
1.禾谷类:通过胚和约在胚乳四 分之三个纵切 2.燕麦属:靠近胚部横切 3.牧草:通过胚乳末端部分横切 和纵切 4.牧草:种子刺穿胚乳 5.莴苣属:通过子叶末端一半纵 切 6.第5种方式进行纵切时的解剖 刀部位 7.伞形科:沿胚的旁边纵切
8.针叶树:种子沿胚旁边纵切
非要害部位弄破种皮。
预湿: 为加快种子充分吸湿，软化种皮，便于样品准备，
以提高染色的均匀度，通常种子在染色前要进行预湿。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
6、测定程序
（1）预处理
预湿
水浸快速预湿：适合于水稻、大豆和花生等作物种子
纸床缓慢预湿：适合于葱、玉米和小麦等作物种子
9.两端横切,打开胚腔,并切去 小部分胚乳.
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
（3）染色温度和时间

农作物种子四唑染色技术规定
将准备好的种子样品放入染色盘中，加入适宜浓度的四唑溶液完全淹没种 子，移置于一定温度的黑暗控温设备内或弱光下进行染色反应。

所用染色时间因四唑溶液浓度、温度、种子种类、样品准备方法等因素的 不同而异。
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第六章 种子活力测定重复间的最大容许差距
计算各重复有生活力种子百分率，重复间误差不得
超过最大允许误差
结果计算到近似整数
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种 子 检 验 结 果 报 告 单
第六章 种子生活力测定的原理和方法
三、种子生活力的其他测定方法
g) 切去种子基端：茜草科等植物种子
h)
斜切种子：菊科、十字花科和蔷薇科等
i) 横切胚乳：黑麦草、羊茅等植物种子 j) 剥去种皮：矮牵牛、茶籽和棉花等植物种子 k) 剥开胚乳取出胚：杜仲等林木种子 l) 横切胚轴和盾片：大麦和小麦等 m) 从果实内取出胚：桃等 n) 横切种子两端：山茱萸和胡颓子等 o) 平切果种皮和胚乳，露出胚的构造：洋葱和菠菜等植物种子
农作物种子四唑染色技术规定
◎ 纸床预湿(小粒豆类种子)
◎ 纸卷预湿(大豆、菜豆、豌豆）
H2O2溶液浸种：
（为了加快种子吸胀和促进酶的活化以及
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缩短预湿时间） 0.3%, 20～30℃, 1 h
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（2）染色前的样品准备
目的：使四唑溶液快速和充分渗入种子全部活组织，加快染色反 应，采用适当方法使胚的主要构造和活的营养组织暴露出来。
力。通常是指一批种子中具有生命力的种子数占种子总数的 百分率。
能发芽的种子 暂时不能发芽而具有生命力的休眠种子
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
2、测定种子生活力的意义
（1）休眠的种子必须进行生活力测定 （2）快速预测种子发芽能力
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二、种子生活力四唑染色测定（TTC test or TZ test）
于1000 ml 蒸馏水；
然后取 2 份母液Ⅰ和 3 份母液Ⅱ混合即成。
AOSA 规程法
在1000 ml 蒸馏水中加入 5.45 g NaH2PO4 和 3.79 g Na2HPO4 ，充分溶解即成。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
5、所需试剂
③ 乳酸苯酚透明液
用于小粒豆类种子或牧草种子,染色后种皮、稃壳或胚乳变为透明。
3、特点
原理可靠
结果准确(与标准发芽率误差一般不超过3-5%) 不受休眠限制 简便快速 成本低廉
6-24h
Vitascope 20-30min
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第六章
种子生活力测定的原理和方法
4、适应范围
测定休眠种子的发芽潜力 测定收获后马上要播种的种子的发芽潜力 测定发芽缓慢的种子的发芽潜力 测定发芽末期未发芽种子的生活力 测定种子收获或加工期间损伤种子的生活力 解决发芽期间遇到的问题 查明种子贮藏期间劣变衰老程度 时间紧迫，调种时快速测定种子生活力

在 20～45℃ 范围内，温度每增加 5℃，其染色时间可减少一半。 达到规定时间或染色已很明显时，倒去四唑溶液，用清水冲洗。 已达到规定时间，样品的染色仍不够充分，可适当延长染色时间，以便证 实是由于四唑溶液渗入缓慢引起，还是由于种子本身的缺陷所引起的。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法


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第六章 种子生活力测定的原理和方法
水稻：凡是胚的主要构造染成正常鲜红色，或胚根尖
端 2/3 不染色而其他部分正常染色的种子为有生活力
种子。
大豆： 凡是整个种子染成明亮红色，或仅胚根尖端
1/3 不染色，或子叶表面有小范围坏死，或子叶顶端 1/3不染色，为有生活力种子。
第六章 种子生活力测定的原理和方法
一、种子生活力的概念和测定意义
二、种子生活力四唑染色测定 三、种子生活力的其他测定方法
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
一、种子生活力的概念和测定意义
1、种子生活力（seed viability）的概念
种子生活力是指种子发芽的潜在能力和种胚所具有的生命
1.0% 四唑溶液；
称取 0.1 g 四唑粉剂溶解于 100 ml 磷酸缓冲溶液中，即配成
0.1% 四唑溶液；
可用 NaOH 或 NaHCO3 溶液调节 ph 值。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
5、所需试剂
② 磷酸缓冲液
ISTA TZ手册法
母液Ⅰ：称取 9.078 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）溶解于1000 ml 蒸馏水中； 母液Ⅱ：称取 9.472 g 磷酸氢二钠（Na2HPO4）或 11.876 g Na2HPO4 · 2H2O 溶解

甲烯兰法 溴麝香草酚兰法（BTB法） 红墨水染色法 软Ｘ射线造影技术
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
一般的鉴定原则：

凡是胚的主要构造及有关活营养组织染成有光泽的鲜红色， 且组织状态正常的，为有活力种子

凡是胚的主要构造局部不染色或染色成异常的颜色和光泽， 并且活营养组织不染成部分已超过二分之一，或超过允许范 围且组织软化的，为不正常种子
凡完全不染色或染色成无光泽的淡红色或灰白色，且组织已 腐化、虫蛀、损伤、腐烂的，为死种子。 各种植物的种子活力判别标准参照种子检验规程。