常用标准筛对照数据表
国际标准ISO 2.00mm 1.00mm 0.841mm 0.355mm 0.250mm 0.150mm
美国筛制标准 中国药典筛标准
No.10
一号筛
No.18
No.20
二号筛
No.45
三号筛
No.60
四号筛
No.100
七号筛
五、操作步骤
2、如发现滤液的颜色较深，应向土壤悬浊 液中加入约0.3-0.5g 无磷活性炭粉，摇匀后 立即过滤，也可在振荡前加入活性炭。
活性炭和滤纸是否含磷可进行空白试验来 验证。
五、操作步骤
3、吸取滤液10.00mL（含磷量高时少吸， 同时应补加0.5 mol/L NaHCO3溶液至 10.00mL）于三角瓶中（注1），然后加入 钼锑抗显色剂5.00mL，慢慢摇动，使CO2 逸出，再准确加入10.00mL水，充分摇匀， 逐尽CO2，在室温高于15 ℃处放置30min 后，进行比色。
土壤有效磷的测定
0.5mol/L NaHCO3 浸提—钼锑抗分光光度法 （Olsen法）
崔玉玲 黑龙江省农垦科学院测试中心
一、概述
土壤有效磷是土壤肥力的重要指标之一,表 明土壤的供磷水平,可以作为判断施用磷肥 的指标,为推荐施肥提供依据。
一、概述
土壤有效磷含量只是一个相对的指标，同 一土壤用不同方法测得的有效磷量可以相 差很多，即使用同一浸提剂，由于浸提条 件如土液比、温度、时间、振荡方法不同 其结果有很大差异，在相同条件下测得的 结果才有相互比较的意义。
一、概述 1、浸提剂
Mehlich3法是近年来研究较多并逐步推广 应用的—种测试方法，其优点主要是一次 浸提可测定土壤中大部分有效养分，便于 大批量分析；缺点是应用时间不长，尚未 建立土壤的丰缺指标体系，需要进行试验 确定。
2、评价结果
即使简单地以“高”、“中”、“低”来 分档,不同提取方法的结果分起档来其数值 相差很远;而且同一提取方法的结果对不同 土壤,不同作物还应该有不同的分档标准。
分光光度计
物质呈现出特征的颜色，就是它们对可见 光中某些特定波长的光线选择吸收的缘故。
一切物质都会对可见和不可见光中的某些 波长的光进行吸收。
分光光度计
日常所见的白光实际上是波长400-750nm 连续光谱的混合光，它是由七色光按一定 的强度比例混合而成。这段波长范围的光 是人们视觉可觉查到的，所以称为可见光。
880nm为近红外光，在此波长处对磷有吸 收，而对杂色又不吸收，故不用脱色。
物质颜色和吸收光颜色的关系
物质颜色
吸
颜
色
收 波
光 长(nm)
黄绿 黄 橙 红
紫红 紫 蓝
绿蓝 蓝绿
紫 蓝 绿蓝 蓝绿 绿 黄绿 黄 绿 红
400 ~ 450 450 ~ 480 480 ~ 490 490 ~ 500 500 ~ 560 560 ~ 580 580 ~ 600 600 ~ 650 650 ~ 750
五、操作步骤
4、以空白溶液为参比液，使用1cm比色皿， 在分光光度计上，用880nm或700nm波长 比色测读吸光度。
五、操作步骤
注1: 由于取浸提滤液10mL于50mL容量瓶中，
加水和钼锑抗试剂后，即产生大量的CO2气 体，由于容量瓶口小， CO2气体不易逸出， 在摇匀过程中，常造成试液外溢，造成测 定误差。为了克服这个缺点，可以准确加 入提取液、水和钼锑抗试剂于三角瓶中， 混匀，显色。
五、操作步骤
5、标准曲线绘制： (1) 分别准确吸取5mg/L磷标准使用溶液0、
2.50、5.00、10.00、15.00、20.00、 25.00mL于50mL容量瓶中，用0.5 mol/L NaHCO3溶液定容。此标准系列中磷的浓度 依次为0、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、 2.50mg/L 。
七、质量控制
6、正确的采样及样品处理； 7、合乎要求的原始记录和数据处理； 8、必要的检查程序等。
一、概述 3、Olsen法的影响因素
因此，在报告有效磷结果时必须同时说明 所用的测定方法。
注意测定方法和标准化。
二、方法原理
石灰性土壤由于大量游离碳酸钙存在，不 能用酸溶液来提取有效磷。一般用碳酸盐 的碱溶液。由于碳酸根的同离子效应，提 取液中的 HCO3-可和土壤溶液中的 Ca2+ 生 成 CaCO3 沉淀，从而抑制了 Ca2+的活度 而使某些活性较大的 Ca—P (磷酸钙盐) 被 提取出来。
二、方法原理
同时由于碳酸盐的碱溶液，在酸性土壤中 因 pH 提高而使 Fe-P （磷酸铁盐）、Al-P （磷酸铝盐）水解而部分被提取，也降低 了铝和铁离子的活性，在浸提液中由于 Ca 、 Fe 、 Al 浓度较低，不会产生磷的次生沉淀。
二、方法原理
此外，碳酸氢钠碱溶液中存在着OH-、 HCO3-、CO32-等阴离子，有利于吸附态磷 的置换。
四、试剂
（4）钼锑抗显色剂 称取0.50g 抗坏血酸(左旋)溶于100mL钼锑
抗贮备液中。 (有效期24小时，如贮于冰箱 中2-8℃，则有效期7天。)
四、试剂
（5）磷标准贮备溶液（100 mg/L） 称取0.4394g KH2PO4 (105℃烘2小时) 溶于
约200mL 水中，加入5mL 浓H2SO4，转移 入1L 容量瓶中，用水定容，可较长时间保 存。
将各次连续测定值与各参比标准进行相关 性分析，结果表明Olsen法对土壤有效磷进 行一次提取已经能够反应土壤的有效磷水 平，无需进行多次提取。
一、概述 3、Olsen法的影响因素
温度： Olsen法不同温度浸提的土壤有效磷试验结
果表明：提取温度对Olsen法测定的土壤有 效磷影响极大，在10～30℃范围内，有效 磷测定值随温度升高而增加，温度每升高 1℃所增加的磷值的平均值为0.44mg／kg， 且随着土壤含磷量高低，其影响程度不同。
四、试剂
（3）钼锑抗贮备液 称取酒石酸锑钾0.3g，溶于100毫升水中，制成 0.3％的溶液。 (Ⅰ)
称取10.0g 钼酸铵溶于300mL 约60 ℃水中，冷却。 (Ⅱ)
另取181mL 浓硫酸缓缓注入约800mL水中，搅匀 冷却 。 (Ⅲ)
将稀硫酸溶液(Ⅲ)注入钼酸铵溶液(Ⅱ)中，边加边 搅动；再将100mL 0.3％的酒石酸锑钾溶液(Ⅰ) 加 入到钼酸铵液中，最后用水稀释至2L，贮于棕色 瓶中，此为贮备液钼酸铵浓度为0.5%，酸浓度为 3.26mol/L (1/2H2SO4)。
四、试剂
（1） 0.5 mol/L NaHCO3浸提液 称取42.0g NaHCO3 于800mL水中，稀释 定容至1L。以50%（m/V）NaOH 溶液调节 浸提液的pH至8.5（用pH计测定） 。贮存 于聚乙烯或玻璃瓶中，用塞塞紧。此溶液 曝于空气中可因失去CO2而使pH增高，使 用前应检查pH是否改变并校准。
四、试剂
（2）无磷活性炭 活性炭常含有磷，应做空白试验，检验有 无磷存在。如含磷较多，须先用后 HCl （1+1）浸泡过夜，在平板漏斗上抽气过滤， 用蒸馏水冲冼多次至无 Cl-为止；再用0.5 mol/L NaHCO3浸泡过夜，在平板漏斗上抽 气过滤，每次用少量蒸馏水淋洗多次，并 检查到无磷为止，烘干备用。 如含磷较少，则直接用NaHCO3 处理即可效P (mg/kg)=C×20×10/V
C—从标准曲线求得查得浓度，mg/L； 20—浸提时的液土比， 50mL/2.50 g ； V—吸取体积，mL。
七、质量控制
质量控制的基本要素： 1、人员的技术能力； 2、合适的仪器设备； 3、好的实验室和好的测量操作； 4、合适的测量方法、标准的操作规程； 5、合格的试剂及原材料；
四、试剂
（6）磷标准工作溶液（5 mg/L ） 取磷标准贮备溶液用0.5 mol/L NaHCO3准
确稀释20倍即为磷标准工作液，此液不宜 久存。
五、操作步骤
1、称取通过1mm (18号筛)筛子的风干土样 2.50g（精确到0.01g）于干燥的200或 250mL塑料瓶中，加入0.5 mol/L NaHCO3 溶液50mL，塞紧瓶塞，在振荡器上振荡 30min(速率为每分钟180次， 25±1 ℃ )， 立即用无磷滤纸过滤，滤液承接于干燥的 三角瓶中，最初7～8ml滤液弃去，同时做 空白试验。
2、分光光度计 可在880nm波长处测读吸光度。 波长不能达到880nm时可用700nm，浸出
液有颜色时可用活性炭脱色。
分光光度计
光的选择吸收： 当一束光照射到某种物质的固态物或溶液
上时，一部分光会被吸收或被反射，不同 的物质对于照射它们的光束的吸收程度是 不同的，对某个波长的光吸收强烈，对另 外波长的光吸收很小或不吸收，我们把这 种现象称为光的选择吸收。
一、概述 2、评价结果

测定方法 0.03mol/L NH4F-
评价标准
0.025mol/LHCl 法
低
﹤15
中
15-30
高
﹥30
0.5 mol/L NaHCO3法
﹤6 6-10 ﹥10
3、Olsen法的影响因素
浸提时间： Olsen法连续提取测定的土壤有效磷的结果
表明，浸提次数对Olsen-P的测定值影响很 大， 0.5 mol/L NaHCO3溶液浸提出的土壤 有效磷量随振荡时间而增加。
在目前使用较广的几种浸提剂中，一般认 为以 0.03mol/L NH4F- 0.025mol/LHCl (BrayⅠ法)浸提剂比较适合于风化程度较高 的酸性土壤；
石灰性土壤通常用 0.5 mol/L NaHCO3 (pH 值为8.5)( Olsen法)浸提比较满意；对于中 性和酸性水稻土NH4F— HCl 法和NaHCO3 法都有应用。