ｍｉｎ。
１．２．２样品处理 准确称取２．０００
０
ｇ植物油于１００ ｍＬ具塞三角
ｍＬ
瓶中，分别加入３０ ｍＬ无水乙醇，２．５
２０％抗坏
图２
质量浓度／ｍｇ／Ｌ ４种植物甾醇标准曲线
血酸溶液，３．ｏｏ ｍＬ５０％氢氧化钾溶液，置８０℃水浴 边加热边震荡４０ ｍｉｎ使其皂化，皂化完全后立即将
２．２精密度和回收率
特别低的色谱柱流失，对难以分离的活性化合物有 良好的峰形。研究选用Ｊ＆Ｗ ＤＢ一５ＭＳ ｕＩ毛细管 ＧＣ柱，考察了进样口温度、进样模式、分流比、初始
温度及升温程序的影响，最终确定１．２．１所述分析
的含量、比例以及总量各不相同。大多数植物油中 Ｂ一谷甾醇质量分数居高，在４７．５％～８９．４％之问， 其中，Ｂ一谷甾醇以橄榄油的质量分数最高，达 ８９．４％；其次为菜油甾醇，１０．６％一５４．５％之间，其中 以菜籽油含量最高，占４种植物甾醇总量的５４．５％， 高于Ｂ一谷甾醇含量。同一种类不同品牌的植物油 中４种植物甾醇比例基本接近，说明植物甾醇含量 比例关系主要取决于原料，这与文献报道一致¨１｜；但 总量存在一定的差异，可能与生产工艺、精炼方法、 储藏条件及原料品种等多种因素有关。 在纯品植物油中，菜籽油和玉米油的４种植物
条件，可在３２ ｍｉｎ内实现植物甾醇与其他不皂化物 的分离，如图３所示。可见，本研究建立的方法可实 现待测组分和干扰组分的良好基线分离。
２（）（）（）０００ ｌ ８０００００ ｌ ６０００００ ｌ ４０００（）（） ４
制ｌ 益ｌ
２００（）ｏｏ ００００００ ８０００００ ６０００００ ４０００００ ｌ
注：１．菜籽甾醇（Ｂｍｓｉｃ∞ｔｅｍｌ）；２．菜油甾醇（ｃⅢｐｅｓｔｅｍｌ）；３．豆
甾醇（蛳印ｍｔｅｍｌ）；４．Ｂ一谷甾醇（ｐ—ｓｉｔ惦ｔｅｍｌ）
图３
玉米油不皂化物总离子流图
花生油ｌ
兰！二二二主耋生二二二亟薹兰二二二三主薹兰二二二兰主主兰兰兰：：兰竺
表３植物油甾醇含量测定结果（ｎ＝３）
一
一 一
２９３．２４±１１．４ｌ
分别准确称取一定量上述４种植物甾醇标准
试验在参考国内外研究基础上¨３。５Ｉ，选用５０％ 氢氧化钾和无水乙醇混合液对样品进行皂化。试验 选取花生油为代表，考察了不同的皂化温度（６５、７０、 ７５、８０、８５℃）、皂化时间（３５、４０、５０、６０ ｍｉｎ）及皂化
２．１标准曲线和检测限 品，加入无水乙醇溶解，１０ ｍＬ棕色容量瓶定容，配制
植物甾醇（Ｐｈｙｔｏｓｔｅｒｏｌ，ｐｌａｎｔ ｓｔｅ词）是一种天然的 植物活性物质，广泛存在于各种植物油、种子和坚果 中，也存在于部分蔬菜水果中…。植物甾醇的结构 与胆固醇相似怛１，为环戊全氢菲的３一羟基化合物，ｃ 一５上有双键的称甾醇，ｃ一５饱和的称甾烷醇。常 见４种植物甾醇为豆甾醇、Ｂ一谷甾醇、菜籽甾醇和 菜油甾醇，其化学结构如图１所示。四种甾醇的区 别在于支链大小和双键数目不同。
表２加标回收试验结果（ｎ＝７）
ｍＬ无水乙醇复溶，经Ｏ．２２“ｍ微孔滤膜过滤后进
ＧＣ—ＭＳ分析。 １．２．３定性和定量分析 植物甾醇的定性方法采用保留时间、标准品比
对和质谱库检索（ＮＩＳ哟５ａ．Ｌ）方法；定量分析采用外 标法，依据总离子流图峰面积计算每种植物甾醇的
绝对含量。
２．３皂化条件的确定
２
结果与讨论
２０１３年２月
中国粮油学报
Ｊｏｕｍａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｃｅｒｅａｌｓ ａｎｄ Ｏｉｌｓ Ａｓｓｏｃｉ蒯ｏｎ
Ｖ０１．２８．Ｎｏ．２ Ｆｅｂ．２０１２
第２８卷第２期
气相色谱一质谱联用法测定１４种食用 植物油中的植物甾醇
杨春英 刘学铭 陈智毅 杨荣玲
林耀盛 赵晓丽
（广东省农产品加工公共实验室广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所／
万方数据
第２８卷第２期
杨春英等气相色谱一质谱联用法测定１４种食用植物油中的植物甾醇
２．５
１２５
２．４最佳色谱分离条件
Ｊ＆ｗ ＤＢ一５Ｍｓ
植物油样品中甾醇的测定与分析
ｕＩ毛细管色谱柱具有超高惰性，
利用上述方法，对市售１４种食用植物油中的４ 种植物甾醇进行了分析，结果见表３。
由表３可知，植物油种类不同，其４种植物甾醇
皂化试液放入冰水浴中冷却。将皂化试液转移至
２５０
ｍＬ分液漏斗中，用４０ ｍＬ超纯水分３次洗涤皂
ｍＬ
为检验该方法对实际样品的适应性，采用标准
品加入法。按上述方法测定，对选取的植物油样品 进行了加标回收试验，每种水平分别做７份平行试
化用的三角瓶，洗液并人分液漏斗中。加入４０
乙醚萃取，重复３次，合并乙醚萃取液，用超纯水洗
１３
２００（啪
０
、¨ｌＩｌＩＩ
４ ６
㈧Ｊ一．
８ １０ １２ １４ ｆ，ｍｉｎ
Ｌ
ｌ“Ｊ、．
甾醇总量最高，约５
０００
ｍｇ／ｋｇ，其次是芝麻油；茶油
１６ １８ ２０ ２２ ２４ ２６
和橄榄油的植物甾醇含量最低，这与该植物油不皂 化物含量（≤１．５％）低有关；除玉米油和菜籽油外， 其余植物油中均未检测到菜籽甾醇；茶油中的豆甾 醇含量较高（２６．９％一２８．４％），高于菜油甾醇，其余
ｌ ０３３．２９±２５．４４ １ ３６６．０ｒ７±３２．９２
花生油２ 花生油３ 花生油４ 花生油５ 花生油６ 花生油７ 花生油８ 茶油１ 茶油２ 芝麻油１ 芝麻油２ 芝麻油３ 玉米油１ 玉米油２ 大豆油 葵花籽油 菜籽油 橄榄油 葡萄籽油 姜油 辣椒油 大蒜油 芥末油 花椒油
一４０９．０９±６．１６
开展了食物中植物甾醇的含量测定及功能评价工
作，并将其作为功能食品的一种添加剂Ｋ一川。传统测 定植物甾醇的方法如重量法、比色法及酶法等，只能 测定甾醇总量，不能实现对具体某一甾醇进行定性 和定量分析¨１；近年报道的方法主要有薄层色谱
法一１（ｒＩＬｃ）、高效液相色谱法¨驯（ＨＰＬｃ）、气相色谱 法…１（Ｇｃ）和气相色谱一质谱法¨２１（Ｇｃ—Ｍｓ）等。 由于Ｇｃ法具有快速简便、灵敏度高和分离效果好等 优点，再加上Ｍｓ的定性效果较好，故本试验在前人研
—
１２２．０９±５．０９ １５３．４７土３．８９ １８４．０９±７．４５ １５５．０３±４．１８ １３５．８９±４．０３ ９７．５ｌ±３．５６ １２４．５９±３．１１ ４８．１５±２．７３ １４４．２９±７．５８ １７２．５４±４．０７ ３３２．２１±１０．０６ ３２８．４３士９．９６ ２８７．９ｌ±５．３８ ３６４．４４±１１．８７ ３３３．９９±１１．３６ １３８．７８±３．２７ ７１．０１±２．８８
成标准储备液，再逐级稀释配制成系列标准工作液。
按照上述分析条件进行检测。以峰面积ｙ对植物甾醇
剂用量对花生油皂化程度的影响，结果表明：样品在 ８０℃水浴条件下，皂化４０ ｍｉｎ即可皂化完全，无水 乙醇和５０％氢氧化钾溶液用量分别为３０．００ ｍＬ和
３．００ ｍＬ．
浓度石进行线性拟合，检出限按Ｓ／Ｎ＝３计算，结果见 表ｌ和图２。可见，在本试验条件下，４种植物甾醇在
涤至中性，过无水硫酸钠除去残留水分。萃取液于 ５０℃水浴中减压浓缩并回收乙醚，残渣用少量乙醚
洗至５ ｍＬ带刻度试管中，氮气吹干，残留物用２．００
验，计算平均回收率和相对标准偏差，４℃冰箱放置
２４
ｈ后再测定，计算其日间变异系数，结果见表２。结
果表明，标准加入的回收率较高（８９．４％一１０６．８％），
ＲＳＤ小于５．５０％，２４ ｈ内测定结果无显著变化。
升温速率升至２８０℃，保持２５ １．２．１．２质谱条件
ｍｉｎ。
１．４Ｅ＋０８ １．２Ｅ＋０８
ＥＩ离子源，电子能量７０ ｅＶ；离子源温度２３０℃； 四极杆温度计１５０℃；传输线温度２８０℃；质量范围
３０～５５０
娶１．０Ｅ＋０８
恒８．ＯＥ＋０７ 磐６．０Ｅ＋０７
４．ｏＥ＋０７ ２．０Ｅ＋０７
ａｍｕ，全扫描方式；溶剂延迟２
２８．４ ２９．９ ３１．９ ３０．９ ３０．６ ３２．５ ２９．１ ２８．２ ２３．６ １９．１
１０５．２３±４．２８
ｌＯ．２ ８．９ ７．２ ８．５ ８．５ ６．８ ８．８ ９．９
６３４．８２土９．７５
６１．４ ６１．１ ６０．８ ６０．６ ６０．８ ６０．７ ６２．Ｏ ６１．９ ４８．Ｏ ５４．０ ６４．７ ６６．１ ６６．２ ５４．７ ５２．５ ４７．５ ６８．２ ３８．４ ８９．４ ６９．５
一
８３４．８９±２１．６７ ｌ ２８７．８９土２５．６２ ｌ ３０４．０５±３１．８８ ｌ １０４．９４±２９．９０
一
一
６７５．５４士１２．５３ ６６５．０５±２０．２６ ５５６．１７±１３．７７
２ １１６．９０±４２．０４ ２ １５３．１９±５９．５９ １ ８１６．１４±６０．８５ ｌ ９９３．２２±４３．９８ ｌ １０２．６４±２６．１７ １ ２５８．１７±３０．９７ １６９．５０±８．１８ ５３５．９９士２５．１４ ２ １０４．６ｌ±４６．５７ ３ ７０１．２８±７９．２２ ３ ５４５．５３士７２．６３ ４ ６７６．３８±８７．８ ５ ２７１．６１±１１１．５８ ２ ２２６．１３±６２．７ １ ４９６．９３±３７．５３ ５ ０１４．８８±１０４．６３ ４８９．３３±１５．９３ ２ ０９３．９２±５１．３５ ５ ３１２．３４±１２２．９７ １ ５３８．５７±５０．４４ ３ ８７９．７４±８２．１７ １ ５８２．６３±５２．３２ ２ ６２３．２８±８１．６８
油茶籽油、花生油、葡萄籽油、芝麻油、大豆油、 菜籽油、玉米油、葵花籽油、橄榄油、花椒籽油、辣椒
油、芥末油、姜油和大蒜油：市售，其中，花椒籽油、辣 椒油、芥末油、姜油和大蒜油均为以植物油为基础添
研究证明，植物甾醇具有降血脂阻４１、防治前列
腺肥大、抗肿瘤、类激素、提高免疫力等多种生理功 能‘５１，在西方很多国家将其应用于人群慢性病预防。