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微生物检验操作步骤

样品制备:
取样品10 g/ml加入至90 ml灭菌生理盐水中,混匀,制成 1 ︰10 的稀释液;
菌落总数:(结果报告:XXX cfu /g(ml))
取上述 1 ︰10 的稀释液 1 ml加入至9 ml灭菌生理盐水中,充分混匀,
制成 1 ︰100 的稀释液;
取上述两个稀释级的稀释液分别加入2块平皿中,每块平皿中加20 ml,然后往平皿中倒入约45℃的卵磷脂吐温80琼脂培养基,待培养基凝固,倒置放于36+/-1 ℃培养箱中培养 48 h,点计菌落数。

霉菌和酵母菌:
操作同菌落总数,加入的培养基为虎红培养基,待培养基凝固,倒置放于℃培养箱中培养 72 h,分别点计霉菌和酵母菌数。

粪大肠菌群:(结果报告(未)检出/ )
取上述 1 ︰10 的稀释液10 ml加入至10 ml 双倍乳糖胆盐培养基中,摇匀,置 44 ℃培养箱中培养 48 h;
如果培养物产酸产气(现象为培养基呈黄色,小倒管内有气泡),则应取培养物分别接种至伊红美蓝琼脂平板于 37 ℃培养 18-24 h和蛋白胨水培养基中于 44 ℃培养 24 h。

在上述平板上,粪大肠菌群呈深紫黑色、圆形突起的菌落,并有金属光泽。

挑取分离的单个菌落,进行革兰氏染色和镜检,在显微镜下应观察到红色短杆状的菌。

挑取菌落时,应使灭菌的接种环冷却后再行操作。

上述蛋白胨水培养基的培养物还需做靛基质试验,阳性现象为培养物表层出现玫瑰红色。

铜绿假单胞菌:(结果报告(未)检出/ )
取上述1 ︰10 的稀释液10 ml加入至90 ml SCDLP 培养基中,摇匀,置 37 ℃培养箱中培养 18-24 h;
挑取上述培养物,接种至十六烷基三甲基溴化铵琼脂平板于 37 ℃培养 18-24 h;在该平板上,铜绿假单胞菌应为灰白色色、圆形湿润的菌落,周围培养基溶有水溶性色的色素;
挑取分离的单个菌落,染色镜检,在显微镜下应观察到红色杆状的菌。

如果平板上只分离到1个可疑菌落,不够做生化试验,则应挑取该菌落于SCDLP增菌培养。

取分离的菌落分别做氧化酶试验、绿脓菌素试验、硝酸盐还原产气试验、明胶液化试验和42℃生长试验。

金黄色葡萄球菌:
增菌培养同铜绿假单胞菌项下,
挑取上述增菌液的培养物,接种至B-P 平板于 37 ℃培养 24-48 h;在该平板上,金黄色葡萄球菌应为灰黑色、圆形的菌落,菌落周围有混浊带和透明环
挑取分离的单个菌落,染色镜检,在显微镜下应观察到紫色球状的菌。

取分离的菌落分别接种至甘露醇发酵培养基和肉汤培养基中,于 37 ℃培养 24 h;取上述肉汤培养物,做血浆凝固酶试验。

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