液相色谱法测定苯甲酸和山梨酸钾的含量
一、仪器
液相色谱仪一台（配C18-BP反相色谱柱，紫外检测器，六通阀，化学工作站），超声波清洗器，流动相过滤装置
二、试剂
分析纯：甲醇，醋酸铵，高纯水，苯甲酸，山梨酸，NaHCO3
三、准备工作
1、1mg/ml 苯甲酸标准贮备液准确称取0.100g苯甲酸，用水适量，加5ml NaHCO3
溶液，定容至100ml备用
2、1mg/ml山梨酸贮备液准确称取0.100g山梨酸，用水适量，加5ml NaHCO3溶
液，定容至100ml备用
3、苯甲酸山梨酸混合标准液利用苯甲酸和山梨酸标准贮备液配置不少于2个不同
浓度标准混合液10ml，取少量过滤后贮存于样品瓶中备用如：
4、流动相
称取02g醋酸铵固体，用纯水溶解稀释到1000ml 配成2g/L醋酸铵溶液，与甲醇混合成（体积比NH4Ac:CH3OH=95:5）流动相，经0.45um滤膜过滤，装于流动相贮液瓶中，用超声波脱气20min备用。

三、实验条件和方法
进样量：10uL；流动相流量：1mL/min；检测器波长：230nm
定性方法：保留时间定性；定量方法：外标峰面积定量。

四、实验步骤
1.打开液相色谱仪开关和检测器开关，仪器自检。

2.打开液相色谱仪冲洗阀，铵冲洗键，冲洗约5~10毫升溶液直至流动相管路无气泡，
再次按冲洗键，关闭冲洗，并关闭冲洗阀
3.按色谱仪“运作/停止”键，启动高压泵系统。

4.打开工作站软件
5.仪器控制→系统配置→验证系统配置→确定。

6.仪器控制→流量1ml/min最大压力25Mpa 检测器→波长230nm→确定。

7.启动基线监测→基线平稳后→停止基线监测。

8.启动数据菜单→屏幕出现绿色小瓶子→进样“LOAD”位置转到“INJECT”位置
9.先进0.1的标样再进0.3/0.35的标样再进试样→保存数据。

10.定量→用标样计算→右击中间空白位置→打开标准样品→选择样1→添加→选标样
2→添加→打开
右击中间空白位置→设置标准样品→点第一个标准样→双击组分名→输入“组分名”
和浓度→确定；点第二个标准样→双击组分名→输入“组分名”和浓度→确定。

11.双击中间空白位置→计算标准曲线。

12.文件另存为→储存方法。

13.打开试样→打开方法→积分→组分表。

如果不出现分析结果，右击组分表→使用时间窗→计算浓度。

14.运行结束“运行/停止”按键（在进行数据处理时可以关闭色谱仪的高压泵）
五、注意事项
1.溶剂和试样一定要用0.45um膜过滤
2.溶剂中的气泡对保留时间重复性影响较大，并且会造成基线噪音。

3.外标法中进样量的不用影响结果的准确性。