拉曼光谱实验问题
请教喇曼谱实验时，如何选择激发波长，1064nm?还是785nm或633nm? 请指教，谢谢！...谢谢专家。

多看看相关文献，我做的蛋白质常用514nm，也可以用紫外200nm附近激发即为共振拉曼，浓度低也可以测。

理论上讲，拉曼光谱与激发光的波长无关。

但有的样品在一种波长的激光激发下会产生强烈荧光，对拉曼光谱产生干扰。

这时要换一种激发光，以避开荧光的干扰。

若样品在不同激光激发下都不发荧光，则随使用哪一种激光都可以。

拉曼散射是光子与分子的相互作用，当激发光子的能量接近两个电子态之间的跃迁能量时，就会出现共振拉曼或者共振荧光。

共振效应（共振拉曼或共振荧光）的存在与否取决于激发激光的波长。

如果激发光子不能给分子提供足够的能量，相应的产生荧光的跃迁将不能发生。

然而，如果产生了荧光，其强度将远远大于拉曼散射光，从而会掩盖拉曼信号的特征。

有时，荧光还来自于被污染的样品中所存在的杂质，或者来自于一种包裹物周围的本底物质。

选择激发激光波长是避免荧光辐射一种行之有效的方法。

对于大多数样品而言，选择近红外或者紫外激光可以避免激发荧光。

近红外激发下，激光光子没有足够的能量以激发出分子荧光；紫外激发下，虽然激发出分子荧光，但是荧光辐射和拉曼信号的能量相差甚多。

原文由wuzl发表:
感谢指教。

喇曼位移应和激发光波长没有关系，但喇曼散射的强度应该和波长的有关，另外仪器光学系统对波长响应也应有最佳选择，选择波长时这2个方面要考虑吗？
根据瑞利定律，拉曼散射线的强度与激发光波长的四次方成反比。

如果不考虑检测器等因素，当然是激发光的波长越短越好，最好是紫外激光。

但可惜的是，现在用于拉曼光谱仪上的CCD最好的响应波长在620nm左右，480nm以下的响应非常差，若CCD技术不进一步改进，紫外激光器对拉曼光谱仪很难说是一种有用的激光器。

一种基于多波长激发的拉曼光谱的荧光消除方法，涉及一种化学分析和光电信号处理方法，它是通过激光光源依次产生的多个相近波长激光照射到同一被测样品上，依次激发出由荧光和拉曼光组成的混合光谱；光谱仪采集到各混合光谱信号，对齐各混合光谱，通过全光谱积分值归一化校正光谱信号幅度，得到经过横坐标对齐和纵坐标幅度校正的光谱；求取各混合光谱两两间差值，该差值即为荧光信号的差分值，计算该差分值的逆差分，逆差分除以差分步长得到的是荧光背景值与一个常数的和，最后从混合光谱中扣除该荧光背景值，即可分离出纯净的拉曼光谱，实现拉曼光谱的荧光消除目的。

本发明方法合理，能有效地消除背景荧光，而且成本低、使用方便，易于推广使用。