显微镜的构造和使用
(7)调焦装置:为了得到清晰的物像,必须调 节物镜与标本之间的距离,使它与物镜的工作距 离相等。这种操作叫调焦。在镜臂两侧有粗、细 调焦螺旋各一对,旋转时可使镜筒上升或下降。 大的一对是粗调焦螺旋,调动镜筒升降距离大, 旋转一周可使镜筒移动2毫米左右。小的一对是 细焦螺旋,调动镜筒的升降距离很小,旋转一周 可使镜筒移动约0.1毫米。在用低倍物镜观察时, 使用粗调焦螺旋;用高倍物镜观察时,用细调焦 螺旋。 (8)聚光器调节螺旋:在镜柱的左侧或右侧, 旋转它时使聚光器上下移动,以调节光线。
(3)在换用高倍镜观察时,视野变小 变暗,所以要重新调节视野的亮度, 此时或升高聚光器或放大虹彩光圈。
5、显微镜使用后的整理 观察完毕,应将镜头转为低倍镜,再水平取下切 片,取下时要注意勿使切片触及镜头,切片取下 后,再转动物镜转换器,使物镜镜头与通光孔错 开,再下降镜筒,使两个物镜位于载物台上通光 孔的两侧,并将反光镜还原成与桌面垂直,擦净 镜体,仍用右手握住镜臂,左手平托显微镜,送 回镜箱中。
(4)镜筒:为显微镜上部圆形中空的长筒,其 上端放置目镜,下端与物镜转换器相连,并使目 镜和物镜的配合保持一定的距离,其作用是保护 成象的光路与亮度。 (5)物镜转换器:接于镜筒下端的圆盘,可自 由转动,盘上有3-4个螺旋圆孔,为安装物镜的 部位,当旋动转换器时,物镜即可固定在使用的 位置上,保证物镜与目镜的光线合轴。 (6)载物台:为放置玻片标本的平台,中央有 一圆孔,以通过光线。两旁装有压片夹或移动器, 可固定玻片标本和移动玻片。
四、作业: 1、绘一个黑藻叶片的细胞图,绘出叶绿体 的分布情况及原生质流动的方向。 五、思考题 1、使用显微镜过程中应该注意哪些事项? 2、在光学显微镜下观察黑藻叶片细胞中的 叶绿体为什么会运动? 3、细胞壁的结构如何?纹孔是怎样形成的? 4、植物细胞有哪些后含物?各以什么形式 存在于细胞的哪一部分?
② 白色体: 白色体是不含色素的质 体,所以无色。多存在 于植物的幼嫩细胞或不 见光的细胞中,取大白 菜的叶柄作徒手切片或 撕取一小块表皮装片观 察:在细胞质中无色的 颗粒就是白色体。 ③ 有色体: 取新鲜红辣椒,切一小 块表皮并带有少量果肉 细胞薄片,装片观察, 细胞质里许多橙红色颗 粒就是有色体。
2、光学部分 由成像系统和照明系统组成,成像系统包括物镜 和目镜,照明系统包括反光镜和聚光器。 (1)物镜:这是决定显微镜质量的最主要部件, 安装在镜筒下端的物镜转换器上,一般有三个放 大倍数不同的物镜,即低倍(10×)、高倍 (40×)、油镜(100×)。使用油镜时,必须 在盖玻片上和聚光器上滴加一滴香柏油(镜油), 然后才能使用。
2、单纹孔的观察 取新鲜红辣椒, 用刀片沿辣椒表 面切取薄片,然 后以表皮外切向 壁朝上装片,先 用低倍镜观察, 选择边缘薄而清 晰的区域,换用 高倍镜寻找呈念 珠状的相邻两细 胞之间的细胞壁 上多处发生相对 的凹陷,这就是 单纹孔对。
3、胞间连丝的观察 取柿胚乳细胞永久制片,置低倍镜下观察,可 以看到很多多边形的细胞壁明显增厚,而细胞 腔小,其内的原生质体被染上颜色或在制片过 程中丢失,使细胞成为空腔。在相邻两细胞加 厚的细胞壁上,选择胞间连丝清晰而比较集中 的地方,换高倍镜观察。那些微细的暗色细丝 即胞间连丝,它们把相邻两细胞原生质体联系 起来。
(二)植物细胞的观察 1、质体的观察 ① 叶绿体及细胞质运动现象: 取一片黑藻茎尖嫩叶,放入载玻片的水滴中,盖上盖玻片, 先在低倍镜下找到清楚的细胞图像,再转高倍镜下观察。在 高倍镜下看更清楚,叶绿体是浸没在细胞质中的,紧贴细胞 之内,有时以其宽面正对视野,即紧贴细胞的上壁或下壁, 常呈扁圆形;有时则紧贴侧壁,使我们看到的是其窄面。同 时,在黑藻叶片细胞里还可看到叶绿体随胞质运动而作一个 或几个方面的流动。温度在25度左右最适宜。注意:观察时, 靠顺脉部位细胞质流动看得更清楚些。
3、用显微镜观察时,切忌睁一眼闭一眼,要左眼窥镜,右眼作图。 4、标本必须加盖玻片,制作带水或药液的玻片标本时,必须两边擦 净再观察,千万不可将药水沾到镜头上。 5、注意防潮,在观察时,显微镜上凝结的水珠(尤其在冬天观察, 呼吸中的水分常在显微镜上凝结成水珠),要及时擦掉,显微镜要 放干燥处保存,镜箱内应放一袋兰色硅胶干燥剂。 6、如遇机件不灵,使用困难时,千万不可用力转动,更不要任意拆 修,应立即报告指导教师,要求协助排除故障,以免造成损坏。
3、低倍镜的使用 观察任何标本,都必须先用低倍镜,因为 低倍镜的视野范围大,容易发现目标和确 定观察的部位。 (1)放置切片:升高镜筒,把玻片标本放 在载物台中央,使材料正对通光孔的中心, 然后用压片夹压住载玻片的两端。
(2)调整焦点:两眼从侧面注视物镜,并慢慢按顺时针 方向转动粗调焦螺旋,使镜筒徐徐下必至物镜玻片约5毫 米处,接着用左眼注视镜筒内,同是按反时针方向,向 右、向内转动粗调焦螺旋使镜筒缓慢上升,直到看见清 晰的物像为止(注意不可在调焦点时边观察边下必镜筒, 否则会使物镜和玻片触碰,压碎破片,损坏物镜)。如 一次调节看不到物像,应重新检查材料是否在光轴线上, 重新移正材料,再重复上述操作过程直至物像出现和清 晰为止。
为了使物像更加清晰,此时可使用细调焦螺旋, 轻微转动到使物像最清楚时为止,但切忌连续转 动多圈,以免损伤仪器的精确度。当细调焦螺旋 向上或向下转不动时,就是转到了极限,千万不 能再硬拧,而应重新调粗调焦螺旋,把物镜与标 本的距离稍稍拉开后,再反拧细焦螺旋,约10圈 左右(因一般可动范围为20圈)。
脐点
轮纹
马铃薯淀粉粒结构图
叶绿体 细胞壁
黑藻细胞原生质流动示意图
②油滴: 用花生种子作徒手切生,挑选薄片放在凹 玻片中用苏丹Ⅲ溶液染色数分钟,再夹到 载玻片观察,看到在细胞内有染成红色的 油滴。 ③蛋白质: 用蓖麻种子胚乳作徒手切片,选择薄片放 入100%酒精中洗涤数分钟,使切片中的脂 肪溶解在酒精中,然后,取出切片用蒸馏 水装片观察。可以看到胚乳细胞内的糊粉 粒存在,它是由贮藏在液泡中一种蛋白拟 晶体、球蛋白体充填的无定形的胶质共同 组成,如果在切片中加一滴碘液,其蛋白 质呈红色。
柿胚乳细胞是具有生 活原生质体的“厚壁 细胞”。实际上这种 组织是一种特殊的薄 壁,即贮藏组织,是 贮藏的营养物质半纤 维素(一种多糖)沉 积在细胞壁上,使其 初生壁相当增厚。
4、细胞贮藏物质的观察 ①淀粉粒: 用镊子或解剖针从马铃薯块茎上刮取少量薄壁细胞放入载玻片的水 滴中,然后加入稀碘液染色。先在低倍镜下找淀粉,再换高倍镜仔 细观察,可以清楚地看到许多从细胞中挤出来的淀粉粒,其上具有 轮纹,各层次轮纹以脐为中心环绕着。根据脐点和轮纹环绕方式不 同,而分为单粒、复粒和半复粒。
2、对光: 一般情况下可用由窗口进入室内的散射光(应避用直射阳光),或 用日光灯作光源。对光时,先把低倍物镜转到中央,对准载物台上 的通光孔,然后用左眼从目镜下注视(左眼不要紧闭)同时,用手 转动反光镜,使镜面向着光源。一般用平面镜即可,光弱时可用凹 面镜,当光线从反光镜面向上反射入镜筒时,在镜筒内就可以看一 个圆形的、明亮的视野,此时再利用聚光镜或虹彩光圈调节光的强 度,使视野内的内线既均匀、明亮、又不刺眼。在对光的过程中, 要体会反光镜、聚光镜和虹彩光圈在调节光线中的不同作用。
(3)低倍物镜的观察:焦点调好后,可根据需 要,移动玻片,把要观察的部分移到最有利的位 置上。找到物像后还可根据材料的厚薄、颜色、 成像的反差强弱等是否合适再进行调节,如果太 亮,可降低聚光器或缩小虹彩光圈,反之则升高 聚光器或开大光圈。
4、高倍物镜的使用 在观察较小的物体或细微结构时使用。 (1)选好目标:由于高倍镜只能把低倍镜视野 中心的一小部分加以放大。因此,使用高倍镜前, 应先在低倍镜中选好之合轴,即使其与镜筒成一 直线(因高倍镜的工作距离很短,操作时要十分 仔细,以防镜头碰击玻片)。
实验一 显微镜的构造和使用 植物细胞 一、目的要求 1、了解显微镜的构造及其维护 2、初步掌握显微镜的使用方法 3、了解植物细胞的基本结构 4、认识纹孔和胞间连丝的形状,并理 解其功能 5、学习临时装片技术和方法
二、实验用品和材料 用品(以后各次实验基本相同): 显微镜、扩大镜、镊子、实验剪、 解剖针、载玻片、盖玻片、纱布、 吸水纸、单面刀片、双面刀片、 蒸馏水、番红、碘液、70%酒精、 醋酸洋红、苏丹Ⅲ等。
(2)调下焦点,在正常情况下,当高倍物镜转正之后, 在视野中即可见到模糊的物像,只要略微调动焦螺旋, 就可获得最清晰的物像。 初用一台显微镜时,必须注意它的高、低倍物镜是否能 如上述情况那样很好的配合?如果高倍物镜离盖玻片较 远看不到物像时,则需重新调整焦点;此时眼睛应从侧 面注视物镜,并小心地转动粗调焦螺旋使镜筒慢慢地下 必到高倍镜头几乎要与切片接触时为止(注意切勿使镜 头紧压玻片,以锡损坏镜头和压碎玻片标本)。然后再 由目镜向下观察,同时向内,向右转动粗调焦螺旋,稍 微升高镜筒至看见物像后,换细调焦螺旋,使物像看得 更加清晰为止。
实验报告纸及绘图工具自备。 三、实验内容和方法 (一)显微镜的构造 一般光学显微镜的构造包括两大 部分,即保证成象的光学系统和 用以装置光学系统的机械部分。
1、机械部分 (1)镜座:是显微镜的底座,支持整个镜体, 使显微镜放置稳固。 (2)镜柱:镜座上面直立的短柱,支持镜体上 部的各部分。 (3)镜臂:弯曲如臂,下连镜柱,上连镜筒, 这取放镜体时手握的部位。镜臂的下端与镜柱连 接处有一活动关节,可使镜体在一定范围内后倾, 便于观察。
(4)聚光器(或镜):装在载物台下,由聚光 镜(几个凸透镜)和虹彩光圈(可变光栏)等组 成。它可将平行的光线汇集成束,集中在一点, 以增强被检物件。聚光器可以上下调节,如用高 倍镜时,视野范围小,则需上升聚光器,用低倍 物镜时,视野范围大,可下降聚光器。 (5)虹彩光圈:装在聚光器内,位于载物台下 方,拨动操纵杆,可使光圈扩大或缩小,借以调 节通光量。
三、使用显微镜时的注意事项 1、显微镜是精密仪器,使用时一定要严格地按 规程进行操作。同时,显微镜的几个主要部件都 是配套的,并已编号,不能互换,特别注意不要 斢错镜Байду номын сангаас。 2、要注意保持显微镜清洁,特别是光学部分, 如有灰尘,要用擦镜纸轻轻擦去。若使用过油镜 头,需用二甲苯擦拭干净镜头与聚光器上的油。