ELISA试剂
（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附 剂）；
（2）酶标记的抗中），
参考标准品和控制血清（定量测定中）； （5）结合物及标本的稀释液； （6）洗涤液； （7）酶反应终止液。
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• 04.浓缩洗涤液（10X） • 04、样品稀释液
• 05.酶联物
• 05、浓缩洗涤液（10X）
• 06.AP底物
• 06、终止液
• 07.八孔板
• 07、阳性质控物
• 08.判读卡
• 08、阴性质控物
• 09.记录纸
• 09、临界质控物
• 10.说明书
• 10、说明书
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三、ELISA分类
免疫标记技术
放射物标记技术
酶标技术
免疫荧光技术
酶联免疫吸附技术 酶免疫组化技术
双抗体夹心法
竞争法
双抗原夹心法
间接法
其他标记技术
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双抗体夹心法
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竞争法
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抗体
• 动物机体受到抗原物质刺激 后，由B淋巴细胞转化为浆 细胞产生的，能与相应抗原 发生特异性结合反应的免疫 球蛋白，这类免疫球蛋白称 为抗体（antibody，Ab）。
• 免疫球蛋白是蛋白质，因此 一种动物的免疫球蛋白对另 一种动物而言是良好的抗原。 免疫球蛋白不仅在异种动物 之间具有抗原性，而且在同 一种属动物不同个体之间， 以及自身体内同样是一种抗 原物质。
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②酶标记的抗原或 抗体（标记物）
Y
Y
③酶作用的底物（显色剂） ①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）
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抗原
• 凡是能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞并能与之结 合引起特异性反应的物质称为抗原（antigen）。
• 抗原的分子结构十分复杂，但抗原分子的活性和特异 性并不是决定于整个抗原分子，决定其免疫活性的只 是其中的一小部分抗原区域。抗原分子表面具有特殊 立体构型和免疫活性的化学基团称为抗原决定簇 （antigenic determinant）或抗原决定基。
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一、ELISA简介 二、ELISA原理 三、ELISA分类 四、ELISA相关试剂 五、ELISA影响因素 六、ELISA应用
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一、ELISA简介
•1971年瑞典学者 Engvall和Perlmann，荷兰学 者Van Weeman和Schuurs分别报道将免疫技术 发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方 法，称为酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，ELISA）。 •自上世纪70年代初问世以来， ELISA发展十 分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学 的许多领域。
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酶标记的抗原或抗体（结合物）
1、酶 • 用于ELISA 的酶应符合以下要求： （1）纯度高，催化反应的转化率高，专一性强，性质
稳定，来源丰富，价格不贵； （2）制备成酶结合物后仍继续保留它的活性部分和催
化能力； （3）在受检标本中不存在相同的酶； （4）相应底物易于制备和保存，价格低廉； （5）有色产物易于测定，光吸收高。 • 常用的酶为辣根过氧化物（horseradish peroxidase，
HRP）和碱性磷酸酶（alkaline phosohatase，AP）。
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酶
底物
显色反应 测定波长
辣根过氧化物酶
邻苯二胺
橘红色
492
四甲替联苯胺
黄色
460
氨基水杨酸
棕色
449
邻联苯甲胺
兰色
2,2‘-连胺基-2(3-乙基-并 蓝绿色
425 642
噻唑啉磺酸-6)铵盐
碱性磷酸酯酶
4-硝基酚磷酸盐(PNP)
黄色
萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐 红色
400 500
葡萄糖氧化酶
ABTS+HRP+葡萄糖
黄色
葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑兰 深蓝色
间接法
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ELISA基本实验过程
• 包被：将已知抗原或抗体通过物理吸附 到固相载体表面，使抗原或抗体固相化
• 抗原抗体反应：先后加入被检标本和酶 结合物，使之与固相抗原或抗体发生免 疫反应而被结合固定
• 酶促反应：在反应体系中加入酶作用的 底物，使发生酶促反应而显色
二、ELISA原理 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
•ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体 的酶标记。 •结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学 活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性， 又保留酶的活性。 •在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与 固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记 的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的 比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有 色产物，产物的量与标本中受检物质的 量直接相关，故可根据呈色的深浅进行 定性或定量分析。
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实验中对照的设置
• 阳性对照 • 阴性对照 • 空白对照 • 临界标准品
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四、ELISA相关试剂
• 01.印迹膜
• 01、微孔反应板
• 02.封闭液
• 02、酶联物
• 03.样品稀释液
• 03、TMB底物
固相抗原或抗体
1、固相载体的性状 • 固相载体在ELISA 测定过程中作为吸附剂和容器，不
参与化学反应。 • ELISA 载体的形状主要有：膜（NC膜、PVDF膜、尼
龙膜）、微量滴定板（96孔板）、小珠和小试管，以 微量滴定板（96孔板）最为常用。 • 良好的ELISA 用96孔板应该是吸附性能好，空白值低 ，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间性能相 近。 2、包被用抗原 • 用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗 原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。 3、包被条件