培养一段时间后，又有小芽陆续分化。培养 4周后， 把这些继代培养的芽丛分割，并移到新鲜的培养基上。 每次继代培养时间约为 4周，芽丛的发生力可保持半 年左右。在每次继代前，高于 3cm的小苗转入培养基： 1/2MS+BA1mg/L 上，可促进幼苗迅速长大。
注意
1、在初级培养和继代培养时，降低 MS中的氮素 营养会导致芽的发生率降低，铵态氮和硝态氮之 比为1：2时对非洲菊芽的增殖最好。
2、随BA浓度的提高，增殖速度相应提高。但在 较高的 BA浓度条件下芽苗会变细、变弱，且随 BA浓度进一步提高，芽苗变得更加丛生、细弱。
3、生产中在努力提高芽苗增殖率的同时，还应 保证分生芽苗的健壮。根据品种不同 ,一般把增殖 率控制在 2.5-5.0 之间。
五．试管苗的壮苗与生根
将长高的无根苗 (2～3㎝)转移到生根培养基，诱导 根培养基： 1/2MS+NAA0.1mg/L 。7～8 天后，小 苗基部会长出 3～5条不定根，12～15天就可以出 瓶，生根率达到 95%以上。
三、外植体的原代培养
把芽放在解剖镜下，无菌条件下，用镊子、刀 片、解剖针等工具把芽外面的幼叶和叶原基除 去，使生长点暴露。用利刀切下含有1～2个叶 原基，大小为０.5mm的生长点。
茎尖分离后，迅速接入MS+6 BA０.5mg／L+ IBA 0.1mg／L原代培养基中。
培养条件为 22～25℃，日照16～18h/d，光强 3000Lx 。注意在低温和短日照下，茎尖有可能进 入休眠，所以较高的温度和充足的光照时间必须 保证。
植物组织培养实用技术
非洲菊组织培养技术
花 卉 组织 培养实用 技术 以 非洲 菊 为例
非洲菊属多年生草本花卉。重瓣花，花色有红、橙红、 淡红、白色，花色艳丽，可用作切花生产或盆栽观赏。
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传统的繁殖方法为播种或分株繁殖，但非洲菊种子寿命 短、发芽率低，而且播种繁殖变异率很高，难以得到性 状一致的种苗，因而不能用于规模生产；而分株繁殖则 存在繁殖慢，易退化和传播病害，也不适于现代的大规 模生产，因而目前国外一般都采用组织培养的方法来生 产种苗。
首先要选择花大、花 色艳丽、市场流行的 品种，然后再选择无 病虫害、植株生长健 壮、花色纯正的优良 品种单株进行取材。
2
外
植
体
的
选
作为外植体的花蕾要 择
选取直径在 1.0 cm 左 方
右，而且未露心的小 花蕾，太大或是太小
法
的花蕾均不能获得满 意的效果。
二．外植体的消毒
方法1 1、剥去外层萼片，在自来水下冲洗干净 2、置0.15%的升汞溶液中浸泡12~15分钟 3、取出后剥去外部所有萼片,在1%的次氯
草莓组织培养技术
草莓属多年生草本植物， 植株矮小。草莓的茎呈 短缩状，地上短缩茎节 间极短，节密集。地下 短缩茎为多年生，可发 育成不定根。叶属于基 生三出复叶，离生雄、 雌蕊离生。 果实为假果， 主要是花托膨大肉质化 形成，瘦果以聚合果形 式生于花托上。果实成 熟时果肉红色，粉红色 或白色。
一、外植体的选择
经过3～4周
的增殖培养 可获得由 30～40个腋 芽形成的芽 丛及植株。
五、试管苗的生根与练苗
生根培养基为 1/2MS+IBAl.0mg ／L，可使发根整齐， 由于草莓地下部分生长快，发根力较强，也可将具有 两片以上正常叶的新茎从试管中取出进行试管外生根。
附加蔗糖30mg/l、琼脂7g/L,pH6.0 。培养温度 25~27℃，光照12～14 小时，光照强度 2000lx。
在无糖的MS培养基上,植株生根快 ,且生根率高。无 糖或低糖培养所生根系发达，呈白色，试管苗过渡 成活率高。糖的浓度以 0～1.5%为好,低盐培养基生 根效果较好。
六．试管苗的移栽与田间管理
欲移栽的组培苗先去掉瓶盖通风炼苗， 3天后将生根 苗洗净根部附着物，移入温室内的珍珠岩 +腐殖土（1： 1）基质中，继续训化
一周内保持遮光 80％和适当的湿度，湿度以 60%～ 70%为宜，温度 15～25℃。一周后，适当增加光照， 且每周淋一次无机液肥。
在2周内保持较高的空气相对湿度， 3周时幼苗长出 白根，新叶抽出。一个月左右长出 4片新叶，株高 6～8厘米，可大定植或上市出售，移栽成活率 97%。
3、用无菌水冲洗 6~7次
4、接种在MS+BA1㎎/L+IAA0.5mg/L 诱导芽培养基上
四．试管苗的增殖与继代培养
培养6~7周以后，愈伤组织上陆续有小芽分化，此时 将带有小芽的愈伤组织切成 2~4个小块，分别移到 MS+BA 0.2 ～1㎎/L+NAA0.2mg/L ﹢KT0.3mg/L 诱导 芽培养基上。
一．外植体的选择 1、文献资料综述
?茎尖是一种较好的外植体，出愈率最高、繁 殖速度快，但取材有限、灭菌很易产生药害。
?幼叶、幼叶柄、花梗作为外植体，可诱导产 生愈伤组织，但是诱导成苗难。
?花托是非洲菊组织培养中比较理想的外植体， 其好处在于花托较大，易于剥取，并有花被包 裏，污染程度轻，易于消毒，污染率低
经2～3个月 的培养，可 生长分化出 芽丛，一般 每簇芽丛含 20～30个小 芽为适。
四、试管苗的增殖与继代培养
把芽丛割成芽丛小块，转入 MS+6－ＢＡ１mg／L培 养基中，令其长大，以利分株，待苗长大到 1～2cm 时，可将丛芽分成有 3～4个芽的小芽丛，再转入前 述的分化培养基中，又会重复上述过程，达到扩大繁 殖的目的。
酸钠溶液中消毒10分钟 4、放入无菌水中充分洗涤3次
方法2 1、剥去外层萼片，在自来水下冲洗干净 2、置70%酒精浸泡30秒 2、用0.1%升汞加数滴吐温浸泡5～8分钟 3、无菌水冲洗6～7次
三．外植体的原代培养
1、将灭菌后的花蕾外植体，剪成 1.0cm长的小段 2、在超净工作台上用 0.1%氯化汞（HgCl2）对外植体 进行表面消毒 6~8min，小心倾去氯化汞溶液
选择结果性优良的草莓 母株上新抽出的匍匐茎 作外植体，以每年6～7 月份最为适宜。
在无病虫害的田块，连续晴天 3～4d时选取生长健壮、 新萌发且未着地的 ①用洗涤灵水溶液洗去材料表面的油质 ②用70％的乙醇浸泡数秒以除去表面的蜡质
③用3％的次氯酸钠溶液 浸泡消毒15～30min，然 后用无菌水冲洗3次