E.coli BL21
实验步骤
1．活化菌种 2．扩大培养 3．生物合成 4．提取纯化 5．电泳检测 6．光谱分析
实验结果:提纯产物
Apo-proteins
CpcA
PecA
Lyases
CpcE/F
PecE/F
实验结果:电泳图谱与光谱
150
0.10
ption [a.u.]
0.08 0.06 0.04
T-型
藻胆蛋白生物合成步骤
Ho1
Heme
PcyA
PCB (phycocyanobilin)
PCB +
Lyase Phycobiliprotein subunit
Apophycobiliprotein
藻胆蛋白生物合成模型
pCDFDuet-lyase or pETDuetபைடு நூலகம்lyase pCOLADuet-apoprotein pACYCDuet-ho1-pcyA
实验项目
藻胆蛋白生物合成与光谱分析
Contents
1. 实验原理
2. 实验步骤 3. 实验结果 4. 注意事项
实验原理:藻胆体结构
Phycoerythrin(PE) or Phycoerythrocyanin(PEC)
Allophycocyanin(APC) Phycocyanin(PC)
藻胆蛋白三聚体与亚基结构
100
scence [a.u.]
注意事项 1．藻胆蛋白生物合成过程必须在低温、 避光条 件下进行。 2．超声波破壁时必需在冰上进行，否则因升温导 致藻胆蛋白的失活，影响最终的光谱。
a-Subunit
b-Subunit
藻胆色素生物合成途径
藻胆蛋白裂合酶催化类型
裂合酶类型 E/F-型 催化产物 PCB-CpcA， PVB-PecA
S/U-型
CpcB-C84-PCB，PecB-C84-PCB， CpeA-C84-PEB，CpeB-C84-PEB ApcA,B,D,F-PCB
CpcB-C155-PCB ，PecB-C155-PCB