分子生物学实验
MolecularBiology Experiments
【课程编号】021*******【课程类别】学科基础课
【学分数】3学分【适用专业】生物科学、生物技术
【学时数】 96学时【编写日期】 2009年6月
一、教学目标
本课程是在分子生物学及基因工程等理论课的基础上，开设的一门综合性兼设计性实验课程。
该的教学内容主要突出实验技术的基础性和实用性，把目前最基本的分子生物学实验技术融入具体的系列实验中形成综合与设计性大实验。
一方面让每个同学通过实际操作来达到更好地训练学生们的实验技术技能的目的；另一方面让学生全面地掌握基因工程的实验技术与方法、实验的设计原理、结果分析方法和分子生物学的基本原理，进一步培养学生的独立分析问题、解决问题的能力并学会如何利用实验手段实现科学研究的基本思维和目的，提高学生从事科学研究的综合素质。
二、教学内容和学时分配
实验一、实验总论5 学时基础性
主要内容：分子生物学基本实验技术简介和实验准备（清理仪器、试剂配置、培养基的配置与灭菌）
教学要求：
了解分子生物学实验课的目的与要求、设计思路、评分标准及仪器操作规范；
掌握试剂与培养基的配置、灭菌方法与操作技能。
重点、难点：学习试剂的配置、仪器操作规范。
实验二、碱性磷酸酶基因的克隆与筛选42学时综合性
主要内容：质粒DNA的提取与定性分析；PCR基因扩增及扩增产物的回收；DNA重组（酶切、连接、转化与筛选）
教学要求：
了解原核基因克隆与筛选的全过程与实验设计策略、载体的基本结构、基因工程酶（限制性内切酶、连接酶、Taq酶）的各种特性、DNA重组以及重组子筛选与鉴定的相关技术；
理解基因克隆与筛选的策略及其相关实验原理、碱裂解法质粒提取过程中各种纯化步骤的设计思想， PCR引物设计以及PCR体系设计的原则与注意事项、DNA重组时设计酶切与连接方案的一般规律、重组DNA导入受体细胞方法以及目的重组子的筛选与鉴定方法、影响DNA重组效率的因素；
掌握质粒DNA的提取与定性定量分析、琼脂糖凝胶电泳、PCR基因扩增及扩增产物回收、核酸的限制性酶切与连接、大肠杆菌感受态细胞的制备及转化、目的重组子筛选与鉴定等各项基本实验技术方法的基本原理与操作技能。
重点、难点：碱裂解法提取质粒DNA的方法、PCR扩增的引物和反应体系的设计、重组DNA的限制性酶切，大肠杆菌感受态细胞的制备与无菌操作以及转化的具体方法和操作技巧，重组子克隆的蓝白斑筛选、大小比较及限制性酶切分析的鉴定方法。
其它教学环节：实验中穿插安排专题讲座、小组讨论与集体讨论。
实验三、碱性磷酸酶基因的原核表达及其表达产物的检测16学时综合性
主要内容：碱性磷酸酶基因的原核表达、最佳诱导时间和蛋白收获时间的确定；表达产物的活性分析；SDS-PAGE检测表达产物；免疫印迹
教学要求：
了解外源基因在原核细胞中表达的特点与方法、如何在蛋白水平上进一步鉴定目的重组子克隆；
理解外源基因在原核细胞中诱导表达的基本原理、影响蛋白表达效果的因素、SDS-PAGE、免疫印迹和碱性磷酸酶活性测定的基本原理；
掌握外源基因在大肠杆菌中诱导表达、SDS-PAGE、免疫印迹和碱性磷酸酶活性测定等的基本实验技术与操作技能。
重点、难点： SDS-PAGE、免疫印迹
其它教学环节：实验中穿插安排专题讲座、小组讨论与集体讨论。
实验四、哺乳动物基因组DNA的分离及Southern检测18学时设计性
主要内容：小鼠基因组DNA的分离与鉴定；基因组DNA的酶切、电泳与转膜；Southern杂交与检测
教学要求：
了解基因组DNA提取过程中各种纯化步骤的设计思想、影响Southern杂交与检测效果的因素；
理解基因组DNA和质粒DNA分离提取方法和设计思想的差异、Southern杂交与检测的基本原理；
掌握基因组DNA的分离与鉴定和Southern杂交与检测的基本实验技术与操作技能。
重点、难点：基因组DNA的分离、Southern杂交与检测中基因组DNA的限制性酶切、转膜、杂交、洗膜和显色反应。
其它教学环节：实验中穿插安排专题讲座、小组讨论与集体讨论。
实验五、植物总RNA的提取及RT－PCR扩增植物看家蛋白15学时设计性
主要内容：植物总RNA的提取；电泳检测与紫外定量测定植物总RNA；RT-PCR扩增植物看家蛋白（β-管蛋白）；电泳检测扩增
产物
教学要求：
了解基因组RNA提取过程中各种纯化步骤的设计思想、影响RT-PCR扩增目标基因的因素；
理解基因组DNA、质粒DNA和总RNA分离提取方法和设计思想的差异、RT-PCR扩增目标基因的基本原理；
掌握基总RNA的分离提取及其定性与定量分析和RT-PCR扩增目标基因的基本实验技术与操作技能。
重点、难点：总RNA的分离提取、RT-PCR扩增目标基因时如何设计阳性对照、阴性对照和实验样品组实验体系。
其它教学环节：实验中穿插安排专题讲座、小组讨论与集体讨论。
三、教材与学习资源
教材：魏群主编，《分子生物学实验指导》（第二版），高等教育出版社，2007年。
主要参考书：
[1].吴乃虎编著，《基因工程原理》，第二版，科学出版社，2001年。
[2].黄培堂等译，《分子克隆实验指南》，第三版，科学出版社，2002年。
[3].梁国栋主编，《最新分子生物学实验技术》，科学出版社，2001年。
教学资源：北京师范大学分子生物学实验Black Board 教学网络平台。
四、先修课要求及教学策略与方法建议
先修课要求：普通化学及实验；有机化学及实验；微生物学。
教学策略与方法建议：本课程采用传统的实验教学方法，结合多媒体、讲座、小组讨论与集体讨论、实验设计、网络教学、教学录像、分子生物学小知识和小技巧介绍等多种教学手段，帮助学生通过本课程的学习全面地掌握分子生物学的基本实验方法与技能以及实验设计的思路，以提高学生从事科学研究的综合素质。
五、考核方式
本课程成绩由实验态度与习惯10%、实验技能30%、实验报告40%和实验设计方案10%和实验总结及体会10%组成，重点考察学生对分子生物学实验基本理论和实验技能的理解、掌握及其灵活应用的能力。