沉淀
氧化铝柱色谱纯化 一
湿法装柱
取一根直径约1.5cm，长约40cm带玻璃活塞的色谱柱，在柱 子的下端填一层松紧合适平整的脱脂棉，将其垂直地固定在 铁架台上
柱内先加入一定体积的洗脱剂(实验中使用的是乙醇)，打开 活塞，放出柱内乙醇，将色谱柱下端的空气泡充分赶尽，然 后再加入乙醇至距色谱柱的下端1-2cm处，关闭活塞
在提取中药其他成分时，少量粘液质的存在 使其水提取液粘稠性较大而极难过滤
稀醇沉淀或加入石灰水形成钙盐沉淀
提取分离的基本原理
小檗碱为季铵碱，其游离型在水中溶解度较 大，其盐酸盐在水中溶解度较小。利用小檗 碱的溶解性及黄柏中含黏液质的特点，首先 用石灰乳沉淀黏液质，用碱水提出小檗碱， 再加盐酸使其转化为盐酸小檗碱沉淀析出。
取中性氧化铝（100—200目)约35g于烧杯中，加入一定体积 的乙醇调成浆状，赶尽气泡，然后经小玻璃漏斗将浆状氧化 铝徐徐注人柱中，当氧化铝到达柱底时，打开活塞，让洗脱 剂缓缓流出，并不断用手轻轻振动色谱柱，使氧化铝沉降均 匀，当柱内液面接近氧化铝柱时，关闭活塞。再轻轻盖上一 层大小合适的滤纸，加上几颗玻璃珠。
中药黄柏主要化学成分简介
药根碱 盐酸盐为黄色结晶， HO mp206℃，在冷水中溶解 MeO 度比盐酸小檗碱大，易溶于 热水和乙醇。
巴马丁 盐酸盐为黄色针晶， MeO mp241℃，在冷水中溶解 度比盐酸小檗碱大，易溶于 MeO 热水和乙醇。
+
N OMe OMe
+
N OMe OMe
生物碱碱性理论要点复习
鉴定实验二
特殊鉴别反应
取盐酸小檗碱少量，加稀盐酸2ml溶解后，加漂 白粉少许，振摇后观察颜色变化。
取盐酸小檗碱50-100mg，溶于50ml热水中，加 入10%氢氧化钠2ml，混合均无沉淀 析出及颜色变化。
鉴定实验三
薄层色谱鉴别
生物碱碱性理论要点复习
一般来说双键和羟基的吸电诱导效应使生物碱的碱 性减小。但具有氮杂缩醛结构的生物碱常易于质子 化而显强碱性。
O
O
N OH
O
O
N + OH -
OMe
OMe
OMe
OMe
粘液质基本知识点复习
定义：与树胶结构相似的多糖类物质 ，多 存于植物薄壁组织的粘液细胞内
基本性质：干燥粘液质为白色粉末，有强烈 的吸湿性，在水中能迅速膨胀，溶解形成粘 稠的胶浆，不溶于有机溶剂。分子中含有酸 性基团——游离的羧基。
中药化学实验
黄柏中生物碱的提取、分离和鉴定 虎杖中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定 槐米中黄酮类成分的提取、分离和鉴定 陈皮挥发油的提取及鉴定 甘草中甘草酸和甘草次酸的提取、分离和鉴定
实验一 黄柏中生物碱的提取、分离和鉴定
目的要求
掌握从黄柏中提取小檗碱的原理和方法。 掌握柱色谱的基本操作以及在中药有效成分
提取分离实验一
黄柏粗粉300g
加入240ml石灰乳①拌湿②，溶胀 30min③， 加入8倍量水浸渍60min ④ ，渗漉⑤
渗漉液
药渣
加入总体积5%的食盐⑥
提取分离实验二
渗漉液
加入总体积5%的食盐， 静置，抽滤⑦
沉淀
滤液
溶于20倍量沸水中，趁热抽滤⑧
不溶物
滤液
加浓HCI调pH2左右⑨， 放置，抽滤
样品：①自制盐酸小檗碱甲醇溶液。②盐酸小檗碱对照 品甲醇溶液。
吸附剂：硅胶G—CMC板，湿法铺板，105℃活化30min。 展开剂：①正丁醇—冰醋酸—水(7∶1∶2，上层)
应用：湿热泻痢、黄疽、带下、热淋、脚气、 骨蒸劳热、盗汗、遗精、疮疡肿毒、湿疹骚 痒；盐黄柏滋阴降火，用于阴虚火旺，盗汗 骨蒸。
中药黄柏主要化学成分简介
小檗碱(berberine)，含量为1.4%-4%(川黄柏含量较高)
性状：黄色结晶，有5.5个结晶水，mp145℃
溶解性：
O
能缓缓溶于冷水中（1∶20）
微溶于冷乙醇（1∶100）
+
N
易溶于热水和熱乙醇
O
微溶或不溶于苯、氯仿和丙酮
OMe
硝酸盐极难溶于水
盐酸盐微溶于冷水（1:500）但较易溶于沸水
OMe
硫酸盐和枸橼酸盐在水中溶解度较大（1 ∶30）
盐酸小檗碱为黄色结晶，含2分子结晶水，220℃时 分解并转变为棕红色小檗红碱，285℃时完全熔融
氧化铝柱色谱纯化 三
洗脱
用滴管吸取乙醇，绕管壁轻轻加入柱内，开启 活塞，控制流速20-30滴/min，不断加入乙醇， 保持色谱柱内乙醇不低于2-3cm高度，待氧化铝 柱上呈现不同颜色的色带时，继续冲洗，使其 彼此分离，并收集开始流出的鲜黄色带，此段 为盐酸小檗碱，其余色带为其他成分。
鉴定实验一
氧化铝柱色谱纯化 二
湿法上样：
取50-100mg盐酸小檗碱粗晶，加少量乙醇于水 浴上加热溶解，用滴管沿色谱柱管壁小心加入， 勿使氧化铝柱面受到振动，开启活塞，当液体 表面下降接触到氧化铝柱面时，关闭活塞。用 少量乙醇淋洗柱内壁，将沾于管壁周围的样品 液轻轻洗人柱面上，至洗净后关闭活塞，准备 进行洗脱。
生物碱的一般鉴别反应
取少量精制盐酸小檗碱，用酸水溶解，分成4份， 分别滴加以下试剂，观察有无沉淀析出及颜色 变化，记录所观察到的现象和反应结果，并根 据现象得出结论。
碘化铋钾( Dragendorff )试剂 碘化汞钾( Mayer )试剂 碘化碘钾( Wagner )试剂 硅钨酸( Bertrand )试剂
提取分离中的应用。 掌握小檗碱的理化性质和鉴别方法
中药黄柏简介
芸香科植物黄皮树Phellodendron chinense Schneid及黄檗Phellodendron amurense
Rupr．的干燥树皮，前者习称“川黄柏”，
后者习称“关黄柏”。
性能：苦，寒。 功效：清热燥湿、泻火解毒、退虚热。
碱性是生物碱最重要的化学性质，也是提取、 分离和结构鉴定的理论依据
生物碱的碱性大小与pKa的关系：pKa＜2为 极弱碱，pKa2~7为弱碱，pKa7~11为中强碱， pKa11以上为强碱
生物碱分子中碱性基团的pKa值大小顺序一 般是：胍基＞季铵碱＞N-烷杂环＞脂肪胺＞ 芳香胺≈N-芳杂环＞酰胺≈吡咯