小鼠骨髓染色体标本的制备.
2、低渗处理:加KCL至2/3管,用吸管打匀使细胞悬浮于低渗液 中,放入37℃恒温水浴锅中,静置25min。(吹打不宜过猛)
3.预固定:加入固定液5滴吹打混匀。
4.离心:2000转/分,离心5min,弃上清液,留下沉淀物。
5、固定:沿离心管壁加入固定液5ml打匀,室温下固定10min。
6、再离心:2000转/分,离心5min,弃上清液,留下沉淀物。
7、再固定:再加入固定液2-3滴,打匀。
8、制片:用滴管吸细胞悬液,从20-30cm高度滴在冰水预浸泡 的洁净载玻片上,立即用口吹散,在酒精灯上过几次或吹风 机吹干。
9、染色:Giemsa染液染色7 min、细水冲洗、晾干。
10、镜检:低倍镜下找到分散良好的分裂相后,换高倍镜、油 镜、认真观察。
四、作业 1 为什么要低渗处理? 2 观察2-3个小鼠骨髓细胞染色体的分裂
相,数一数有几条。
小鼠骨髓染色体标本的制备
实验五、小鼠骨髓染色体标本的制备
一、实验目的: 掌握小鼠骨髓染色体标本的制备方法。
观察小鼠染色体的形态和数目。 二、实验原理
小鼠骨髓细胞用秋水仙素积累分裂相, 用0.075 mol/L-1KCI进行低渗后,经 固定、染色,可见到分散的染色体。
三、实验步骤:
1、取材:以颈椎脱臼法处死小鼠,取两腿股骨,剔净肌肉,擦 去附着在上面的血污,剪取两端股骨头,暴露骨髓腔,用注 射器吸取KCL(0.075mol/L)溶液,将针头插入骨髓腔上段冲洗, 用离心管接收冲洗液。