涂片要略厚 加温染色或延长染色时间，加温时随时补加 染色液 分枝杆菌呈红色(+) 其他细菌和背景为蓝色(-)。
操作过程
取痰液→ 涂片（略厚）→干燥→固定 →
石炭酸复红加温染色8~10分钟后→ 用3%的盐酸酒精脱色约1~2分钟， 脱色时轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止 水洗后，用碱性美蓝复染1分钟→水洗， 印干 → 镜检
细菌的等电点较低，约在pH 2～5之间， 故在中性、碱性或弱碱性溶液中，菌体 蛋白质电离后带负电荷，易与带正电荷 的碱性染料如龙胆紫及碱性复红等结合， 使细菌被染成紫色或红色。
一、细菌染色标本片的制备
细菌染色检查，首先要进行细菌标本制 备。制备细菌标本一般包括涂片、干燥、 固定三步。
固定的目的和方法
结晶紫初染
１分钟水洗
卢戈碘液媒染
１分钟水洗
（４）
９５％乙醇脱色
３０秒水洗
复红复染
３０秒水洗吸干
结晶紫初染１分钟
水
洗
碘液媒染 １分钟
水 洗
酒精脱色 ３０秒
水 洗
复红复染
３０秒
水 洗
滤纸吸干 油镜镜检
抗酸染色法(acid-fast stain)
分枝杆菌属的细菌（包括结核分枝杆菌、 麻风分枝杆菌等）为抗酸性细菌，一般染 色法不易着色，须用抗酸染色法。 注意事项
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘得 更牢固 可改变菌体对染料的通透性 加热固定可杀死细菌，比较安全 固定的方法将制成的标本匀速通过火染 （碘液） 脱色（酒精） 复染（复红）
Crystal violet
滤纸吸干 油镜镜检
safranin
染色步骤
（１） （２） （３）
常采用美蓝，结晶紫等碱性染料进行染色。 多数染料都是中性有机盐。据着色基的不同 可分为以下类型：
碱性染料（basic dye）—带正电染料。其阳离子 部分为发色基团，可与细胞中带负电的组分结合。 酸性染料（Acid dye）—带负电染料。其阴离子 部分为发色基团，可与细胞中带正电的组分结合。
革兰染色原理
结核分枝杆菌(M.tuberculosis)
形态：
细长，略弯曲的杆菌，多聚集成团。无鞭毛,芽胞。
染色性：
不易着色，抗酸染色阳性。菌体呈红色，背景中其他物质 蓝色。
细菌基本形态结构观察
基本形态
球菌 杆菌 弧菌
葡萄球菌 链球菌 肺炎球菌 脑膜炎球菌 革兰阴性 革兰阳性
特殊结构
芽孢 枯草杆菌，破伤风梭菌 荚膜 肺炎球菌 鞭毛 变形杆菌
肺炎（双）球菌
荚膜
常用的细菌染色方法
革兰染色 抗酸染色 细菌基本形态结构观察
细菌染色意义
由于细菌个体微小，基本上无色透明， 故将其用适当染料染色观察，方能显示 它的形态、大小、构造及染色特性等， 在细菌鉴别上有重要意义。 革兰染色是细菌学中使用最广泛的一种 染色方法，籍此染色法，可将所有细菌 区分为两大类。
细菌染色方法及原理