华南师范大学实验报告
液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯
、实验目的
1、掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法; 了解高效液相色谱的构造、原理及操作技
术。
、实验原理
高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动，经过反复多
次的吸附一解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次
从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。
三、主要仪器和试剂
主要仪器：岛津液相色谱仪（LC-10AT）［配有紫外检测器，Phenomenex ODS 柱］;
10 微量注射器
试剂：苯标准溶液：10.0卩L/mL ;
甲苯标准溶液：10.0卩L/mL;
苯、甲苯混合标准溶液：10.0卩L/mL ;
甲醇：80% ;
苯和甲苯混合待测溶液；
四、实验步骤
1、标准溶液的配制系列
用100 的微量注射器分别量取10卩1、20卩1、50 、100 的苯和甲苯的混合标
准溶液（10.0卩L/mL，再分别加入90订80订50 X、0 甲醇将其稀释，作为待测液，其浓度分别为1卩L/mL、2卩L/mL、5卩L/mL、10卩L/mL
2、色谱条件优化
①按操作规程开机，并调好色谱条件，使仪器处于工作状态。
控制流动相流速为甲醇：
0.8mL/min、水：0.2 mL/min ;柱温30C；检测波长254nm ;观察记录保留时间，通过软件分析两峰分离效果。
②改变色谱条件，控制流动相流速为甲醇：0.95mL/min、水：0.05 mL/min ;柱温30C；检测波长254nm ;观察记录保留时间，通过软件分析两峰分离效果。
③通过观察两种色谱条件下的峰分离效果，选择最佳的色谱条件。
若还不能达到最佳 的分离效果，可以再设定不同的色谱条件，然后根据峰分离效果，选择最佳的色谱条件。
3、苯、甲苯定性分析
在最佳条件下，待基线走稳后，用 10 uL 微量注射器分别进样 5 uL 苯和甲苯混合待测 溶液，
5uL 苯标准溶液（10.0 u L/mL 和5uL 甲苯标准溶液（10.0 u L/mL ）（微量注射器用甲 醇润洗3〜5遍），观察并记录色谱图上显示的保留时间，确定苯和甲苯的峰。
4、苯、甲苯定量分析
最佳条件下，待基线走稳后，用 10 uL 微量注射器分别进样 1.0 u L/mL 、2.0 u L/mL 4.0
u L/mL 10.0 u L/mL 的苯和甲苯混合标准溶液 5 uL 观察并记录各色谱图上的保留时 间和峰面
积。
绘制苯和甲苯混合标准溶液峰面积与相应浓度的标准曲线。
5、苯和甲苯混合待测溶液分析
最佳条件下，待基线走稳后，用10 uL 微量注射器进样苯和甲苯混合待测液
5 uL 观
察并记录各色谱图上的保留时间和峰面积。
根据峰面积在工作曲线上查出苯和甲苯待测液的 浓度，并计算试样中苯和甲苯的含量。
五、实验数据及分析
高效液相色谱数据报告
、色谱条件优化
、定性分析
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0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5min
5. 色谱
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0.0 1.0
6.0 min
5.0
4.0
3.0
2.0 3 2
1.
4.0-
样品苯甲苯
保留时间 3.765 4.917
三、定量分析
苯、甲苯混合标准溶液浓度分别为：1 ul/ml, 2 ul/ml, 5 ul/ml, 10 ul/ml
四、未知样品浓度
未知样品 苯 甲苯 浓度2
2.7ul/ml
3.6ul/ml 浓度1
2.9 ul/ml
3.6ul/ml
六、实验讨论
甲苯
面积(x1,000,000)
浓度 峰面积 浓度 峰面积 1 ul/ml 212685 1 ul/ml 387710 2 ul/ml 429291 2 ul/ml 747983 5 ul/ml 954537 5 ul/ml 1533892 10 ul/ml 1905343
10 ul/ml 2928373
Y = aX + b a = 186510.8 b = 36165.15 R A
2 = 0.9995768 R = 0.9997884
Y = aX + b a = 278490.9 b = 146280.5 RA2 = 0.9991048 R = 0.9995523
5 0 5 0 5 0 2 211o O
7.5
①由于实验中待测溶液的组分只有苯和甲苯两种物质，组分比较简单，只要在实验过程中，严格控制且定量进样，就能采用操作、计算简便的标准曲线法得出准确的实验结果，
因而采用标准曲线法。
若采用归一化法或内标法，虽然能得到准确更高的实验结果，但由于实验操作及计算均较为复杂，实验及数据处理的时间长，效率相对不高，故实验中采用标准曲线法作为定量的方法。
②最佳色谱条件的选择是本实验准确度的关键。
若苯与甲苯的峰分离效果过小，苯与
甲苯的峰未能完全分离，必定影响其保留时间和峰面积的计算，是实验准确度减小，数据误
差加大；若苯与甲苯的峰分离效果过好，虽然能将苯与甲苯的峰完全分离，实验准确度好，但是耗费的实验时间较长，效率不好。
因而，应选择合适的色谱条件。
③为了提高标准曲线的拟合度，可以重复进样多次，并且由同一人进样，以免因个体
习惯不同引起实验误差。
进样针进样时确保进样针中没有残留气泡，另外，在进不同浓度或
不同的物质前因先用乙醇溶液润洗干净，以免相互影响。