据图所示，有关工具酶功能的叙述错误的是( D )
A.限制性核酸内切酶可以切断a处 B.DNA聚合酶可以连接a处 C.解旋酶可以使b处解开 D.DNA连接酶可以连接c处
提醒： １.氢键的断裂需要解旋酶的作用，而重新形成 是自然形成的，不需要酶的作用。 ２.DNA连接酶无识别的特异性，凡两个黏性末 端(或平末端)能互补配对，DNA连接酶就能催 化其“缝合”，重新形成DNA分子。
载体的化学本质是ＤＮＡ分子，λ噬菌体的 衍生物、动植物病毒作运载体时，实质上 是它们内部的ＤＮＡ充当载体。
• 最常用的载体：质粒
此质粒来自 大肠杆菌--说明没有危 害
（真正用作载体的质 粒，都必须在细胞外 经人工改造）
标记基因:
筛选含有目 的基因的受 体细胞
有切割位点
（一个或多个）
进入受体细胞能复 制或整合到染色体 DNA上随染色体同 步复制
四、分子水平检测与个体水平（检测）鉴定
(1)分子水平检测法 检测DNA分子(基因)-------- DNA分子杂交技术 检测RNA-------- 分子杂交技术 检测蛋白质-------- 抗原-抗体杂交
考点3:基因工程的操作步骤
说出基因工程的基本操作步骤？核心步骤是？哪几步 用到了限制酶，又有哪几步涉及碱基互补配对？
一、获取目的基因1、从基因中获取 (适用于目的基因序列为末知情况） 2、利用PCR技术扩增 （适用于目的基因的序列为已知且基因比较大）
3、人工合成(化学方法) (基因比较小，序列已知)
起始密码和终止密码是位于mRNA上，起始密码 位于mRNA的首端，它驱动mRNA翻译成多肽链， 终止密码位于mRNA的尾端，使翻译停止。
二、构建基因表达载体
基因表达载体的构建是基因工程的核心步 骤，原因是什么？
原因是该步骤决定目的基因进 入受体细胞后是否能够稳定的 存在、复制和表达。
质粒上有标记基因如图所示，通过标记基因可以 推知外源基因(目的基因)是否转入成功。外源基 因插入的位置不同，细菌在培养基上的生长情况 也不同，下表是外源基因插入位置(插入点有a、b、 c)，请根据表中提供的细菌生长情况，推测①② ③三种重组后细菌的外源基因插入点。
注：受体细胞的种类 植物：可以是受精卵、体细胞（可经组织培养 成为完整个体） 动物：受精卵（体细胞的全能性受到抑制）
1.抗虫棉的培养
1.获得抗虫基因主基要途径有哪些?若对目的基因进行 大量扩增用什么技术?在基因表达载体中，Bt毒蛋白基 因的首端必须含有什么结构？基因表达载体构建中用到 哪些工具？ 2.在培育转基因植物的过程中,抗卡那霉素基因常作为标 记基因,则在培育愈伤组织的培养基中,除含有必要的营 养物质、琼脂、激素外，还必须加入什么物质？
2.转基因动物
①获得目的基因后，常利用技术将目的基因导 入受精卵？ ②载体上绿色荧光蛋白(GFP)基因的作用？基因 表达载体d，除图中的标出部分外，还必须含有？
3、“工程菌”
(1)首先从口蹄疫病毒中提取合成病毒蛋白的 RNA，原因是病毒蛋白质具有_抗__原__特性，又 不会需先将大肠杆菌处理为___感_受__态__细胞。 (3)为什么选择大肠杆菌作受体细胞？
1.下列获取目的基因的方法中需要增目的基因
③反转录法
④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成
A.①②③④
B.①②③
C.②③个种群中全部个体所含有的全部基 因，叫做这个种群的基因库。
(2010·苏州模拟)下图为DNA分子在不同酶的 作用下所发生的变化，图中依次表示限制性核 酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋 酶作用的正确顺序是 ( Ｃ )
A．①②③④ C．①④②③
B．①②④③ D．①④③②
(2007全国）下列有关基因工程中限制内切酶 的描述，错误的是 A、一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱 氧核苷酸序列 B、限制性内切酶的活性受温度的影响 C、限制性内切酶能识别和切割RNA D、限制性内切酶可从原核生物中提取
（2014湛江一模2）下列有关叙述正确的是 A．人类基因组计划是从分子水平研究人类遗 传物质的系统工程 B．人类基因组计划只需测定人的1人类的基因库仅含有男性的全部基因
➢区别启动子和起始密码、终止子与终止密码
启动子、终止子是属于基因的结构,启动子位 于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的 部位，它驱动基因转录出mRNA,终止子位于 基因的尾端，使转录在所需要地方停止下来。
（2013湛江二模）下图A为4种限制酶的识别序 列和酶切位点，图B为含有荧光素酶基因的DNA 片段及其具有的限制酶切点。若需利用酶切法获 得荧光素酶基因，最应选择的限制酶是
__M_s_p_Ⅰ__________。
➢载体的类型有哪些？最常用的又是什么？
质粒(最常用） λ噬菌体的衍生物 动植物病毒等
细菌在含氨苄青霉 细菌在含四环素
素的培养基上的生 的培养基上的
长状况
生长状况
①
能生长
能生长
②
能生长
不能生长
③
不能生长
能生长
①是c；②是b；③是a
三.将目的基因导入受体细胞（转化）
转化（P12）：将目的基因导入受体细胞内， 并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
植物细胞 ①农杆菌转化法（双子叶、裸子植物） ②基因枪法（单子叶植物） ③花粉管通过道法（开花植物） 动物细胞 ④显微注射技术（导入受精卵） 微生物（原核细胞）： ⑤Ca2+处理法
答案：C
下列所示的黏性末端是由几种限制性核酸内切酶 作用产生的( D )
A.1种
B.2种
C.3种
D.4种
提醒： １.不同DNA分子用同一种限制酶切割形成的 黏性末端都相同；不同限制酶切割不同DNA分 子也可以形成相同的黏性末端。
２.限制酶对外不对内，主要切割外源ＤＮＡ， 而对自身的ＤＮＡ不起作用，达到保护自身的 目的；