提 问
1.其由何种细胞产生？
？
2.主要分布在哪里？
3.如何得到抗体？
思考
人们获得抗体的传统方法是?
将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体
这种方法的缺点是什么?
效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可能产生严重的过 敏反应。
运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？ 能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的 抗体呢？
5.动物细胞培养技术的应用:
1.蛋白质生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 2.应用于基因工程
主要用于作为受体细胞
3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4.用于细胞的生理、药理、病理研究
为治疗和预防疾病提供理论依据 如用于筛选抗癌药物
动物细胞特点？ 分化潜能变窄：随着细胞分化程度的提高而逐 渐受到限制，分化潜能变窄，这是指整体细胞而 言。 细胞核仍具有全能性：细胞核，它含有保持物 种遗传性所需的全套基因，而且并没有因细胞分 化而丢失基因，因此高度分化细胞的细胞核仍具 有全能性
细胞增殖。 问题8、动物细胞培养的原理：
问题9、目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在10代 以内，为什么？
10代以内的细胞遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。
问题10、为什么对动物细胞进行培养时通常要添加 血清？ 血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等， 其中蛋白质为白蛋白和球蛋白；氨基酸有多种，是 细胞合成蛋白质的基本成分，有些氨基酸动物细胞 不能合成，必须由培养液提供；血清激素有胰岛素、 生长激素等及多种生长因子；还含有许多未知的促 进细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质。因 此，细胞培养要保证细胞能顺利生长和繁殖，一般 要添加10%----20%的血清。
3、单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，可大量制备。 4、单克隆抗体的应用
作为诊断试剂：在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定
（CO2维持培养液的PH。）
动物细胞培养液的主要特点：
动物体细胞大都生 活在液体的环境
（1）液体培养基
与植物培养基相比其特点是： （2）含有动物血清
植物细胞和动物细胞培养的比较
比较项目 植物组织培养 动物细胞培养
原理
培养基性质 培养基特有成分
细胞的全能性 固体培养基 蔗糖、植物激素
细胞增殖 液体培养基 葡萄糖、动物 血清
7.体细胞核移植技术存在的问题
看书P49-50页
胚胎移植－动物幼体产出 克隆动物存在着健康问题
概率＜10％
克隆动物的食品安全性问题存在争议
一、动物细胞融合 细胞杂交
1、定义：指用两个或多个动物细胞 融合成一个细胞的过程。
◆杂交细胞：融合后形成的具
有原来两个或多个细胞遗传 信息的单核细胞成为杂交细 胞。 2、原理、方法：
保留融合活性 （诱导细胞融合） 细胞融合、形成杂种细胞
思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的 病毒需要灭活？不灭活行吗？
因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂 质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭 活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。
4、动物细胞融合技术的应用
细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂 交成为可能。 发展起来的杂交瘤技术，制备单克隆抗体新途径。
细胞发生 突变（不 死性）
无限传代
动物细胞培养过程中几个重要的概念
■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称 为细胞贴壁。
■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于帖附。
接触抑制
■当贴壁细胞分裂生 长到表面相互接触时, 细胞就会停止分裂增 殖，这种现象称为细 胞的接触抑制。
动物细胞培养特点：贴壁生长、接触抑制：
胚胎或幼龄动物器官组织
增殖能力强，分裂旺盛，分化 程度低，容易培养 剪碎
取出组织
原 代 培 养
胰蛋白酶处理
单个细胞
去掉组织间 蛋白
加培养液
细胞悬液
转入培养瓶内培养
过程：
健康动物的组织
剪碎 胰蛋白酶
单个细胞
加培养液
细胞悬浮液装瓶培养
贴壁生长、 接触抑制
部分细胞细 胞核型变化
分瓶
原代培养
10代细胞 传代培 50代细胞
培养结果
培养目的
植物体
快速繁殖、培育 无病毒植株等
细胞群
获得细胞或细 胞产物
问题1：、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细 胞培养材料？
因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。
问题2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？
扩大细胞与培养液的接触面积，利与细胞吸收营养。
问题3：为什么用胰蛋白酶处理？
总结：动物细胞培 养过程
为什么用胰蛋白酶处理？
动物胚胎或幼龄动物 的组织、器官 单个细胞
剪碎用胰蛋白酶处理 加培养液稀释
培养特点：细胞贴壁、接触 配置细胞悬液 抑制 转入培养瓶
传代10代以内，遗传物质不改变， 分瓶 保持正常二倍体核型。
原 代 培 养
传 代 培 养
传代10-50代左右，增长缓慢以 至于完全停止，部分细胞核型可 能发生变化（遗传物质可能改变） 40-50代细胞 继续传代培养少部分细胞获得不 死性，细胞突变，遗传物质已经 改变，等同于癌细胞。
10代细胞
无限传代
离体培养的细胞对 4、动物细胞培养条件 微生物和有毒物质 没有防御能力 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 保证细胞顺利 2、营养 的生长增殖 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血 清、微量元素等） 3、温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 能否用胃蛋白酶 4、气体环境 代替胰蛋白酶？ O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
回顾：

植物细胞工程常用的技术手段有哪些？
植物组织培养 植物体细胞杂交

动物细胞工程常用的技术手段：
1.动物细胞培养 3.单克隆抗体 5.核移植 2.动物细胞融合 4.胚胎移植
专题2 细胞工程
2.2 动物细胞工程
大面积烧伤怎么办？
专题2 细胞工程
2.2 动物细胞工程 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
1、概念：化学性质单一、特异性强的抗体。
设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体
小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖
杂种细胞
抗原 ？
2.制备过程：
效应 ？ B细胞
诱导其融合的 方法有哪些？
经免疫的小鼠
提取
B淋巴细胞
小鼠骨髓瘤细胞
灭活的病毒等手段
杂交 细胞
用特定的选 择性培养基
第一次筛选
杂交瘤细胞 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件 下能无限增殖的杂交瘤细胞
B淋巴细胞在体外不能无限增殖。
单克隆抗体的制备—极富创造性的方案
将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能 力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交 瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一 的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原 决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。 米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝 尔奖。
克隆动物：通过核移植实现
二、动物体细胞核移植技术和克隆动物
细胞核移植技术 1、定义： 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞 核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其 重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发 育为动物个体. 2、原理： 动物细胞核具有全能性 3、分类： 胚胎核移植、体细胞核移植。
问题强化：
1）本过程利用了哪些原理？ 免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理 2）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质， 不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的 本领，因而可以获得大量单克隆抗体 3）为何要进行两次筛选？
第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得 到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。
类似植物细胞工程
细胞融合是正常的生命活动
受精作用
两个细胞正在融合
动物 细胞 融合
3、诱导融合的方法
病毒颗粒黏 附细胞表面 化学法：聚乙二醇PEG诱导融合.
物理法：电激融合
生物法：灭活的病毒诱导融 细胞膜被 病毒颗粒穿通
合.(利用灭活仙台病毒是动物细
胞融合所特有的）
仙台病毒
（细胞膜具有一定的流动性） 细胞膜连接 丧失感染性 （不感染细胞）
问题5：用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？
控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。
问题6、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物 组培培养基有何独特之处？ 主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维 生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、 成分中有动物血清等 问题7、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最 终培养成新个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发 育成新的动物个体
动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，胰 蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的蛋白质和 细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。
问题4：为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？
动物细胞培养的最适PH值为7.2-7.4，胰蛋白酶作用的适 宜PH为7.2-8.4，胃蛋白酶适宜PH为2.胃蛋白酶在PH为 7.2-7.4的动物细胞培养中无活性。
归纳:
1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植 2.取卵母细胞作受体细胞的原因是:它是最大的细胞,易操作； 含有激发细胞核全能性的物质 3.严格来说新个体有卵母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状
6.体细胞核移植技术的应用前景
看书P49-50页
1）加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 2）保护濒危物种，增加存活数量 3）克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 4）可以作为异种移植的供体，可以用于组织 器官的移植