变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染实验
一变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
配制溶液：
1、30% Acrylamide（14.5 g 丙烯酰胺，0.5g 双丙烯酰胺，加水溶解，定容至50 ml，4℃，棕色瓶中储存）
2、10% 过硫酸铵（0.5g APS，溶于5ml 去离子水中，4℃可储存数个月）
3、10 ×TBE 缓冲液（10.8g Tris,0.744g EDTA,5.5g 硼酸，定容到100ml）
4、TEMED
5、20-200 DNA marker
6、尿素
实验步骤：
1、配置10%的胶10ml：8M*10ml*60g/mol=4.8g 尿素
6.1ml water
3.3ml 30% Acrylamide
1ml 10 ×TBE
0.11ml APS
0.01mlTEMED
2、立即将胶倒入两块板间并插好梳子，放置，待凝固30min，时间可以适当延长。

3、向电泳槽加入1×TBE，拔出梳子并用注射针筒多次洗涤点样孔，尽可能排除未聚合
的丙烯酰胺。

4、将DNA marker 加到点样孔中，以120V（10V/cm）进行电泳直到燃料走到靠近底部
的三分之一处，大约需要60-90分钟。

二银染实验
银染溶液的配置：实验之前准备4℃水
1、固定液（10%醋酸）：20ml冰醋酸，180mlddH2O混匀（通风厨中进行）
2、染色液：将0.1g AgNO3溶解于100 ml ddH2O中，使用前加1.5ml37%甲醛溶液，必须
储存于避光瓶中，防止接触皮肤（通风厨中进行）
3、显影液：将30gNa2CO3溶解于ddH2O中，冷却至4℃，使用前加1.5ml37%甲醛溶液
（通风厨中进行），0.1M五水硫代硫酸钠150μl；（0.1M Na2S2O3。

5H2O：将2.48g Na2S2O3。

5H2O溶于100mlddH2O）。

注意事项：
1、染色液和显影液要现用现配；
2、显影液必须在4℃使用且必须保存在4℃；
3、甲醛蒸汽致癌，在通风厨内操作；
4、实验室中柔和的背景光线有利于降低背景颜色；
5、显色不能在透光的盒子中进行；
6、溶液不能直接倒在胶面上，应使盘倾斜后将溶液倒在盘的角上，或者将每种溶液各方
一盘，然后将胶从一个盘转到另一个盘；
7、溶液的体积必须足够将胶全部浸没；
8、显色过程中盘中须轻轻摇动。

实验步骤：
1、固定：用刀子轻轻分开玻璃板，将带有凝胶的一块玻璃板放入盛有200ml固定液的盘
子中，放在水平摇床上摇动20min或直至染料带完全消失
2、洗涤：把固定液倒回大烧杯中，然后用ddH2O清洗三次，每次2min
3、染色：把玻璃板放在盛有100ml染色液的盘子里，在水平摇床上摇动30min
4、显影：把玻璃板在预冷ddH2O中快速过一下（不超过10s），迅速放入预冷（4℃）的
显影液中，显色3-5min或直至所有的带都出现
5、停止：当出现清晰的条带时，加入先前用过的500ml固定液轻轻摇动，停止显影
6、用ddH2O将凝胶洗2次，每次2min
7、晾干，扫描
8、拍照观察。