分布于机体组织中，它主要位于溶酶体中，也有少量在 内质网中。巨噬细胞、前列腺、空肠上皮纹状缘、肝、 脾、肾及肾上腺等尤为丰富。
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Holt与Bitensky改良磷酸铅法
作用原理
试剂配制
染色方法
对照
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结果
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作用原理 在酸性PH值的情况下，给切片加入甘油磷酸 酯（或任何磷酸单酯），如有酸性磷酸酶，则释放磷酸酯， 后 者 与 高 浓 度 的 Pb2+ 结 合 ， 形 成 无 色 的 磷 酸 铅 ， 经 硫 化 胺 （或硫化氢）作用，磷酸铅转变为黑色硫化铅：
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碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase , ALP）广泛存在
于机体组织，常见于具有活跃转运功能的细胞膜内，如毛细血 管及小动脉的内皮，肝内胆小管膜，肾近曲小管的刷状缘，肾 上腺、膀胱、脾脏内皮细胞以及乳腺和卵巢中。
显示碱性磷酸酶的方法有多种，最常用的是金属沉淀的钙 钴法。
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应用组织化学技术（histochemical technics）,显示组 织细胞内的各种化学物质和代谢状态。光镜组织化学技 术(microscopic histochemical technics)所显示的组织化学 物质，是呈色反应(staining rection)，呈色反应的强或弱， 表示组织细胞内化学物质含量的多少。酶组织化学 (enzyme histochemical )，所显示酶的呈色反应的强或弱， 也称酶活性反应(enzyme active rection)。光学显微镜下
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Gomori-Takamatsu法
作用原理
试剂配制
染色方法
结果
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注意事项
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作用原理 在PH9.4及Ca2+存在的情况下，给切片加入甘 油磷酸酯（或任何磷酸单酯），如有碱性磷酸酶，则释 放磷酸酯，后者与高浓度的Ca2+结合，形成无色的磷酸 钙，经硝酸钴处理后，磷酸钙转变磷酸钴，再经硫化胺 作用，磷酸钴转变为黑色硫化钴：
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染色方法
①未固定的新鲜组织用恒冷切片机切片；
②在孵育液中，37℃孵育切片，不同的组织孵育的时间不同； ③充分蒸馏水洗，以除去未被吸附的或未沉淀的铅；
④切片入硫化氢液10～60s； ⑤充分蒸馏水洗；
⑥在甘油明胶封固剂中封固。
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对照片 在孵育液中加入0.01M氟化钠。
结果 硫化铅沉淀为黑色或棕色的沉淀
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（一）酶的分类 1． 水解酶 2． 氧化还原酶 3． 转化酶 4．连接酶 5． 裂解酶 6． 异构酶
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（二）酶的组织化学反应法
1． 偶氮染料法 2． 吲哚酚法 3． 金属---金属盐法 4．氧化-还原反应法 5．色素形成法
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酶类
酸性磷酸酶
Holt与Bitensky改良磷酸铅法
甘油磷酸酯酸性磷酸酶磷酸酯+铅
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磷酸铅
硫化铅
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试剂配制
①孵育液 在400ml0.05M醋酸缓冲液（PH值5.0）中加入0.53g 硝酸铅及40ml3%的β-甘油磷酸钠溶液，在37℃放置24h产生一 些沉淀物，冷却后过滤，过滤后立即使用。
②硫化氢液 用浓硫酸作用于硫化锌或硫化铁，所产生的硫化 氢气体用通过很稀的盐酸洗去气体中的杂质后，再通过50ml蒸 馏水中，每分钟通过120个气泡的速度10min即可。
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染色方法
① 将未固定的组织在恒冷切片机切片；
② 用新配制的作用液（孵育液）孵育切片，37℃，10min （切片8μm厚）；
③ 流水冲洗5min；
④ 入2%硝酸钴溶液中5min；
甘油磷酸酯 碱性磷酸酶 磷酸酯 +Ca2+ 磷酸钙 硫化钴（黑色） 磷酸钴
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+Co2+ 19
试剂配制
① 作用液
2%巴比妥钠（5，5-二乙基巴比妥钠）10ml
3%β-甘油磷酸钠10ml 2%无水氯化钙10ml
2%硫酸镁1ml
蒸馏水5ml
本液PH值为9．4。
②对照液 在上述液中用10ml蒸馏水代替3%β-甘油磷 酸钠。
组织化学技术概述
(人体解剖与组织胚胎学系)
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一.组织化学的定义
组织化学（histochemistry）技术是通过化学 或物理反应原理显示组织切片或细胞内某种化学 成分，进行定位、定量及其与功能相关的研究。
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2
二.组织化学的研究概况
随着科学技术的不断发展，组织化学在近几十年来
已经得到了迅速的发展，产生了许多分支，如核酸与蛋 白质、蛋白质与氨基酸、脂类与蛋白质、碳水化合物与 粘蛋白及粘多糖、无机物组织化学、酶组织化学、电镜 组织化学、荧光组织化学、免疫组织化学、同工酶组织 化学、定量组织化学、原位杂交组织化学和放射自显影 技术等。因此，现代组织化学的概念已经大大的超过了 以往的范畴，无论从理论、内容、研究手段、研究范围 都比以往更广泛及更深入。
所见的组织化学呈色反应也称阳性反应(positive rection)。
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4
电子显微镜组织化学技术(electron microscopic histochemical technics)，是在电 镜观察时，所显示的化学物质，呈现出的电
子密度(ectron dendity)高或低即表明所含量的 程度，或酶的活性强、弱。光镜和电镜组织
Gomori与McDonedel硫化铅法
碱性磷酸酶 Gomori-Takamatsu法
Байду номын сангаас
Gomori改良钙钴法
Gomori萘酚磷酸酯法
琥珀酸脱氢酶 Nachlas硝基蓝四唑法
Pearson二甲亚砜法
过氧化物酶 Graham-Karnovsky法
Vitale辣根过氧化物酶
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酸性磷酸酶（Acid Phosphatase , ACP）广泛
化学，均可对所显示的化学物质和酶类，在
组织细胞内，进行定性、定量和定位观察。
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5
三.组织化学研究的内容
酶类、糖类、脂肪、核酸、蛋白质等
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酶（Enzyme）
酶（Enzyme）是具有催化功能的一种特殊蛋白质，人 体的各种机能活动都与酶的活性有密切关系，生物体内的一 切新陈代谢活动都是在酶的催化作用下进行的。因此，酶在 机体内的各种反应和鉴定手段涉及到各种基础学科，如组织、 生理、生化和病理等已成为日益为人们所重视的内容之一。