超氧化物歧化酶(SOD )活性的测定方法
一、试剂
1. 0.1mol/L HCl
2. 10mmol/L HCl
3. 0.1mol/L Tris 标准溶液:12.114g 三羟甲基氨基甲烷溶于蒸馏水,并定容至1000ml.
4. 50mmol/LTris 缓冲溶液:50ml0.1mol/L Tris 标准溶液中加入0.1mol/L HCl 19.9~22.0ml,定容至100ml ,PH 为8.20。
5. 30mmol/L 邻苯三酚盐酸溶液:3.7833g 邻苯三酚溶于10mmol/LHCl 中,并用10mmol/LHCl 定容至1000ml.
二、仪器
1. 紫外分光光度计
2. 酸度计
3. 恒温水浴锅
三、操作方法
1.邻苯三酚自氧化速率测定
在试管中加入4.5ml 50mmol/LTris 缓冲溶液,于25℃保温20min,加入10~20ul 30mmol/L 邻苯三酚,立即计时并摇匀,倾于比色杯内,于325nm 下,每隔1min 测吸光值一次,空白以10mmol/L HCl 代替邻苯三酚,要求自氧化速率控制在0.070 OD/min 左右。
%1004
min 1min 5⨯值值-第第自氧化速率=OD OD 2.SOD 活性测定
将样液加入到Tris 缓冲溶液中,其余步骤同自氧化速率测定方法。
活力单位定义:将一定条件下使每毫升反应液自氧化速率抑制50%的酶量定义为一个单位(u )。
样品质量样液体积样品稀释倍数自氧化速率速率自氧化速率-样液氧化=活力(⨯⨯⨯⨯5.4%50%100)/SOD ml u。